知母皂苷B-Ⅱ的藥代動力學(xué)及代謝機(jī)制研究.pdf

1、中藥在我國有著悠久的使用歷史，經(jīng)歷了幾千年的臨床驗證，歷久彌新。大量基礎(chǔ)與臨床研究證明其在某些病癥有著獨特的治療作用，由于其相對低毒、不良反應(yīng)發(fā)生率低、程度較輕等特點，受到越來越多的關(guān)注，近年來，以中藥為代表的天然藥物在世界各地的使用大幅增長，但是大量的天然藥物成分存在吸收利用度低、代謝過程不清楚的情況，這成了新藥創(chuàng)制過程中的“攔路虎”。
　　 本課題以臨床常用中藥知母中提取的天然有效成分知母總皂苷及其主要有效成分知母皂苷B-Ⅱ

2、為主要研究對象，在建立知母總皂苷半成品、成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，運用LC-MS/MS聯(lián)用分析技術(shù)為主要檢測手段，建立知母皂苷B-Ⅱ體內(nèi)定性定量分析方法，深入探究其體內(nèi)代謝動力學(xué)特征及體內(nèi)外代謝機(jī)制，內(nèi)容包括:
　　 1、分別建立注射用知母總皂苷半成品、成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對知母皂苷B-Ⅱ進(jìn)行薄層鑒別，結(jié)果薄層鑒別斑點清晰、分離度好、專屬性強(qiáng)、陰性對照無干擾;采用高效液相色譜法非別對知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷E1、知母

3、皂苷B進(jìn)行含量測定。結(jié)果表明方法簡便、可靠、重現(xiàn)性好，可作為知母總皂苷半成品、成品的質(zhì)量控制方法。
　　 2、分別靜注給藥5.4、1.8和0.9 mg/kg三個劑量的知母皂苷B-Ⅱ，AUC0-t分別為12560.62±2304.23 ng.h/mL、2363.64±184.44 ng.h/mL、843.70±34.28ng.h/mL,Cmax分別為48996.55±9472.31 ng/mL、12295.36±816.69 ng

4、/mL、3876.93±189.20ng/mL，其Cmax及AUC0-t均與給藥劑量呈正相關(guān)，表現(xiàn)為線性藥代動力學(xué)特征。Cmax和AUC0-t與給藥劑量呈正相關(guān)，表明知母皂苷B-Ⅱ靜注后在大鼠體內(nèi)為線性藥代動力學(xué)特征。以180mg/kg、90mg/kg和30mg/kg三個劑量組分別對大鼠灌胃知母皂苷B-Ⅱ后的AUC0-t分別為2291.38±1294.56 ng.h/mL、331.01±218.25 ng.h/mL、123.64±124

5、.92ng.h/mL，Cmax分別為1654.56±1342.83 ng/mL、442.69±353.38 ng/mL、56.60±39.44ng/mL，顯示Cmax和AUC0-t與給藥劑量相關(guān)性不太強(qiáng)，AUC0-t隨劑量增加較快。另外，給藥知母皂苷B-Ⅱ后，Beagle犬藥時曲線圖也存在雙峰現(xiàn)象或多峰現(xiàn)象，推測可能存在腸肝循環(huán)現(xiàn)象。分別口服與靜注給藥，得到各自的藥時曲線下面積，由此計算出相對生物利用度值在0.75％左右，結(jié)果表明，知母

6、皂苷B-Ⅱ在SD大鼠體內(nèi)的的口服生物利用度比Beagle犬略高，但都相對較低，也進(jìn)一步顯示知母皂苷B-Ⅱ原型藥物在胃腸道中吸收很弱。
　　 知母皂苷B-Ⅱ在SD大鼠體內(nèi)組織分布結(jié)果顯示:大鼠靜注給藥后消除速度較快;6小時后在各臟器中基本原形無藥物蓄積，各臟器組織中的藥物濃度均明顯低于血漿藥物濃度，其中肝、心、肺組織藥物濃較高，大腦最少。這可能與其吸收代謝過程緩慢有關(guān)。藥物的主要吸收部位是小腸，所以藥物駐留而達(dá)到最高濃度。

7、　　 知母皂苷B-Ⅱ原型藥物在SD大鼠體內(nèi)排泄研究顯示:該藥0～30h內(nèi)從膽汁排泄的藥物量占總給藥量的1.27％，0～96h內(nèi)從尿液中排泄的藥物量為占總給藥量的1.55％，96h內(nèi)累積糞便中排泄量為給藥劑量的0.048％。
　　 3.采用平衡透析法測定知母皂苷B-Ⅱ在人血漿中的蛋白結(jié)合率，結(jié)果表明，與血漿蛋白結(jié)合率實驗結(jié)果顯示，知母皂苷B-Ⅱ藥物濃度與血漿蛋白結(jié)合率之間無顯著性差異(p＞0.05)，而透析時間和血漿蛋白結(jié)合率之

8、間則存在一定差異(p＜0.05)，72h后，藥物在血漿和透析中達(dá)到平衡。結(jié)果表明，72h后，藥物在血漿和透析中達(dá)到平衡，本品在血漿和透析中達(dá)到平衡，知母皂苷B-Ⅱ的蛋白結(jié)合率大于85％，提示藥物進(jìn)入體內(nèi)后，與血漿中的蛋白相結(jié)合，而發(fā)揮作用的是游離態(tài)的藥物所以可能會影響藥物向組織分布。
　　 4、利用LC-ESI-MS/MS技術(shù)，對知母皂苷B-Ⅱ在大鼠體內(nèi)的代謝進(jìn)行了初步探索。結(jié)果在胃腸內(nèi)容物樣品中共檢測到M1～M6等6種代謝產(chǎn)物

9、;尿液樣品中檢測到M1、M2、M4等3種代謝產(chǎn)物;在糞便樣品中檢測到M1、M4等2種代謝產(chǎn)物。三種樣品共同的代謝產(chǎn)物為M1知母皂苷AⅢ和M4知母皂苷元。
　　 采用人肝微粒體體外孵育實驗，通過IC50值判斷知母皂苷B-Ⅱ?qū)YP3A4、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2E1和CYP2D6這6種酶活性是否產(chǎn)生作用，從而影響經(jīng)人體的6種代謝酶的底物經(jīng)藥物代謝酶的代謝。實驗結(jié)果表明知母皂苷B-Ⅱ?qū)ι鲜鏊幬锎x酶的抑制