柴胡中皂苷類(lèi)成分的藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布研究.pdf

1、選題依據(jù)：近年來(lái)研究表明柴胡具有保肝、解熱、抗炎等多種藥理活性。關(guān)于柴胡皂苷藥代動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)代謝過(guò)程的研究雖然很多，但是多數(shù)針對(duì)柴胡皂苷單個(gè)化合物，體現(xiàn)不出中醫(yī)理論的整體性，關(guān)于體內(nèi)組織分布的研究匱乏，僅發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷d的研究，故本研究對(duì)柴胡藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布進(jìn)行更加全面深入研究。
　　中藥煎煮是傳統(tǒng)用藥和臨床用藥的主要方式，隨著中藥材現(xiàn)代研究手段的增多，有越來(lái)越多的工藝選擇了醇提方式。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為藥材水煎能夠促進(jìn)其在體內(nèi)的吸

2、收，最大限度發(fā)揮藥效，現(xiàn)代研究認(rèn)為藥材醇提后能夠得到更多有效成分，利于藥效發(fā)揮。那么這兩種不同提取方式對(duì)柴胡的化學(xué)成分和體內(nèi)過(guò)程有什么影響呢，尚不清楚，故本研究比較了醇提和水煎后柴胡在體內(nèi)外成分種類(lèi)和數(shù)量的差異，并對(duì)兩種提取方式進(jìn)行柴胡藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　中藥材除單味藥材制劑外，更多通過(guò)配伍后以方劑形式使用，柴胡有很多應(yīng)用廣泛的方劑如逍遙散，小柴胡湯等，柴胡-白芍藥對(duì)是出自《太平惠民和劑局方》，臨床應(yīng)用歷史悠久，與白芍配伍對(duì)柴胡

3、在體內(nèi)的影響尚不清楚，本文通過(guò)柴胡與白芍配伍前后水煎液中主要成分的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布研究，對(duì)白芍對(duì)柴胡在體內(nèi)的影響進(jìn)行初探。通過(guò)這一系列研究為柴胡臨床用藥和新藥研發(fā)提供基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　目的：首先，對(duì)柴胡中化學(xué)成分進(jìn)行全面分析，并比較三種樣品（柴胡醇提物、柴胡水煎液、柴胡+白芍水煎液）中化學(xué)成分種類(lèi)和數(shù)量差異；其次，基于代謝組學(xué)方法篩選柴胡藥代動(dòng)力學(xué)指標(biāo)成分，對(duì)指標(biāo)成分進(jìn)行定量分析，并比較三種樣品間含量差異；再次，對(duì)柴胡藥代動(dòng)力

4、學(xué)及組織分布進(jìn)行探究，并比較不同提取方法、配伍對(duì)柴胡藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布的影響。為臨床合理用藥及柴胡相關(guān)新藥研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　1.建立柴胡中化學(xué)成分定性分析的UPLC-MS方法。色譜條件：BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）；流動(dòng)相為0.1％甲酸水（A）-乙腈（B）；梯度洗脫：0～30 min，10%～60%B；30～40 min，60%～90%B；40～45 min，90%B；體

5、積流量0.3 mL/min；柱溫35℃；質(zhì)譜條件：ESI源：+3.0 KV/-2.7 KV;Sheath Gas Pressure:35arb;Aux Gas Pressure:10arb;Capillary Temp:300℃;Heater Temp:300℃; Scan mode: Full MS( Resolution70000) and dd-MS2( Resolution17500, NCE25, Stepped NCE50%

6、);Scan range:m/z150~2000。
　　2.對(duì)柴胡醇提物給藥前后的大鼠血清進(jìn)行UPLC-MS分析，結(jié)合代謝組學(xué)、PCA、OPLS-DA分析找出柴胡藥代動(dòng)力學(xué)指標(biāo)成分，色譜條件與質(zhì)譜條件同1。
　　3.建立柴胡中指標(biāo)成分SSa、SSc、SSd、SSb1、SSb2的UPLC含量測(cè)定方法，并應(yīng)用于柴胡醇提物、柴胡水煎液、柴胡+白芍水煎液。色譜柱：BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）；流動(dòng)相

7、：水（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～6 min，30%B；6～10 min，30～37%B；10～17 min，37%B；17～23 min，37%～90%B；23～25 min，90%～90%B；體積流量0.3 mL/min；柱溫35℃；PDA全波長(zhǎng)掃描。
　　4.建立血清中指標(biāo)成分的UPLC-MS含量測(cè)定方法，并應(yīng)用于藥代動(dòng)力學(xué)研究；同時(shí)對(duì)血清中其它原型成分進(jìn)行半定量分析，便于全面了解柴胡在機(jī)體內(nèi)行為。選用雄性SD大鼠，隨機(jī)

8、分為3組，分別灌胃給予大鼠柴胡醇提物、柴胡水煎液、柴胡+白芍水煎液，分別于給藥前及給藥后0.083 h，0.25 h，0.5 h，0.75 h，1h，1.5 h，3 h，5 h，8 h，12 h經(jīng)眼眶取血約0.5 mL，測(cè)定血藥濃度，繪制藥-時(shí)曲線(xiàn)，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。
　　5.建立組織中藥代指標(biāo)成分SSa、SSc、SSd、SSb1、SSb2 UPLC-MS含量測(cè)定方法，并應(yīng)用于組織分布研究。選用SD大鼠，隨機(jī)分為3組，分別灌胃給予大

9、鼠柴胡醇提物、柴胡+白芍水煎液、柴胡水煎液，給藥后0.25 h、0.5 h、0.75 h、3 h、5h處死取心、肝、脾、肺、腎組織，樣品經(jīng)預(yù)處理后，采用上述方法測(cè)定組織中各皂苷類(lèi)成分的含量，完成組織分布研究。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)柴胡的主要化學(xué)成分進(jìn)行UPLC-MS分析，總結(jié)皂苷類(lèi)成分裂解規(guī)律，檢測(cè)鑒定出柴胡皂苷類(lèi)成分23種。比較三種樣品中成分，結(jié)果顯示柴胡醇提物中成分種類(lèi)和數(shù)量多于水煎液，但是SSb1和SSb2水煎液中略

10、多；與白芍配伍前后無(wú)明顯差異。
　　2. UPLC-MS分析灌胃給予柴胡醇提物前后血清，通過(guò)代謝組學(xué)方法篩選出5種VIP值較大的藥材原型成分：SSa、SSc、SSd、SSb1、SSb2，將其作為柴胡藥代動(dòng)力學(xué)指標(biāo)成分。
　　3.建立了5種皂苷類(lèi)指標(biāo)成分的UPLC含量測(cè)定方法，測(cè)定了柴胡不同提取方法下的樣品（水煎液和醇提物）中皂苷類(lèi)成分的含量，結(jié)果表明：醇提物中的SSa、SSd的含量明顯高于水煎液中，水煎液中的SSb1和SSb

11、2含量明顯升高。本方法穩(wěn)定，快速，方便，便于推廣，為柴胡的質(zhì)量控制提供了基礎(chǔ)。
　　4.在藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中，得到了各成分血藥濃度、藥-時(shí)曲線(xiàn)圖、藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果顯示各成分的Tmax在0.5 h左右，t1/2在1.5 h左右，Vz/F遠(yuǎn)大于0.67 L/kg（大鼠體液體積），表明柴胡皂苷類(lèi)成分具有吸收快、消除快、分布廣的特點(diǎn)；柴胡水煎液與柴胡醇提物組相比較，各成分的消除變緩；與白芍配伍后，各成分的吸收變緩，消除加快。
　　5.

12、組織分布實(shí)驗(yàn)中，本研究測(cè)定的5種柴胡皂苷類(lèi)成分組織分布存在一定相似性。灌胃給予大鼠柴胡醇提物后，SSa、SSd、SSc、SSb1、SSb2在肺、肝中的分布量較大，表明與肺、肝組織的親和力較強(qiáng)。灌胃給予柴胡水煎液后，SSa、SSc、SSb1、SSb2與肺、心的親和力較強(qiáng)，尤其是肺組織，表明其更傾向于向肺組織分布；柴胡水煎液組與醇提物比較，向肺組織的分布趨勢(shì)相同，對(duì)于其它組織，水煎液組傾向于心組織，醇提組傾向于肝組織，可能由兩種提取物中共存

13、成分不同導(dǎo)致；灌胃給予大鼠柴胡+白芍水煎液后，各成分在腎組織分布量明顯增大，并且含量高于肺組織，表明與白芍配伍增加了柴胡皂苷腎組織分布，這一現(xiàn)象可能與白芍的收斂作用有關(guān)。
　　結(jié)論：本研究通過(guò)UPLC-MS分析鑒定了柴胡中23種化學(xué)成分，結(jié)合代謝組學(xué)篩選出柴胡藥代指標(biāo)成分5種，并對(duì)其進(jìn)行了定量分析。本研究中建立的UPLC-MS方法靈敏、快速、可靠，并成功的用于柴胡藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布研究，獲得了柴胡皂苷類(lèi)成分的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，揭示了各