應(yīng)激狀態(tài)下大鼠腸屏障功能損傷過程中細(xì)胞因子的改變及意義.pdf

1、目的：探究應(yīng)激狀態(tài)下大鼠腸粘膜屏障功能的改變，以及在此過程中某些細(xì)胞因子的作用和它們之間的相關(guān)性，以期初步了解腸屏障損傷的細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制，尋找能夠阻斷腸屏障功能損傷過程的保護(hù)因素，為臨床嚴(yán)重應(yīng)激和危重病患者的治療和預(yù)后探索新的途徑。 方法：健康Wistar大白鼠60只，雌雄不限，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、對照組和正常組，每組20只。實(shí)驗(yàn)組通過以顯微手術(shù)用無損傷動脈夾夾閉腸系膜上動脈起始部，1小時(shí)后松夾恢復(fù)腸系膜上動脈血流制成腸缺血后再灌流

2、模型，對照組只進(jìn)行同樣腹部手術(shù)操作但不夾閉腸系膜上動脈。正常組不手術(shù)。6小時(shí)后處死動物，3組同樣進(jìn)行腸系膜上動脈多聚甲醛灌注，取距回盲部15厘米處腸管1厘米，常規(guī)固定、石蠟包埋，組織切片，通過普通HE染色觀察腸粘膜組織細(xì)胞學(xué)形態(tài)；用免疫組織化學(xué)方法染色顯示腸粘膜組織或細(xì)胞中腫瘤壞死因子、血管活性腸肽、基質(zhì)金屬蛋白酶-13及層粘連蛋白的表達(dá)情況；并用VIDAS圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果：普通HE染色結(jié)果顯示：光鏡下，實(shí)驗(yàn)組

3、與對照組相比，可見腸壁變薄，上皮細(xì)胞水腫明顯，部分壞死脫落，小腸絨毛短細(xì)，絨毛間距變寬。中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤，個(gè)別腸粘膜固有層內(nèi)腺體出現(xiàn)灶性區(qū)域壞死。免疫組織化學(xué)染色顯示：實(shí)驗(yàn)組腸粘膜上皮細(xì)胞胞漿及基質(zhì)腫瘤壞死因子表達(dá)較對照組增高，VIDAS圖象分析測得光密度值分別為：實(shí)驗(yàn)組0.45±0.0183，對照組0.27±0.0196，正常組0.26±0.0187；粘膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-13表達(dá)較對照組增高，VIDAS圖象分析測得光密度

4、值分別為：實(shí)驗(yàn)組0.29±0.0253，對照組0.16±0.0249，正常組0.15±0.0251；基底膜層粘連蛋白表達(dá)較對照組降低，VIDAS圖象分析測得光密度值分別為：實(shí)驗(yàn)組0.29±0.0672，對照組0.47±0.0685，正常組0.50±0.0679，實(shí)驗(yàn)組和對照組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異有顯著性(P＜0.01)，對照組與正常組相比無明顯差異(P＞0.05)。腸粘膜上皮細(xì)胞核內(nèi)血管活性腸肽表達(dá)較對照組增高，VIDAS圖象分析測得光密

5、度值分別為：實(shí)驗(yàn)組0.13±0.0303，對照組0.11±0.0208，正常組0.10±0.0378，實(shí)驗(yàn)組和對照組統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異有顯著性(P＜0.05)。對照組與正常組相比無明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論：應(yīng)激時(shí)由于缺血再灌注，腸粘膜上皮細(xì)胞胞漿和基質(zhì)腫瘤壞死因子、上皮細(xì)胞核內(nèi)血管活性腸肽表達(dá)失衡導(dǎo)致粘膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-13表達(dá)增高，進(jìn)而使其降解底物層粘連蛋白降低，腸粘膜萎縮及通透性增大，導(dǎo)致腸屏障功能損傷、腸源性細(xì)菌