氧化應(yīng)激對成骨細(xì)胞功能影響中microRNA的作用機(jī)制研究及FRAX_對絕經(jīng)后女性高糖應(yīng)激狀態(tài)下骨折概率的評估.pdf

1、目的：本研究旨在探討氧化應(yīng)激對成骨細(xì)胞功能影響中microRNA的作用機(jī)制，以及FRAX(R)對絕經(jīng)后女性高糖應(yīng)激狀態(tài)下骨折概率的評估。
　　方法：1、采用不同濃度過氧化氫（H2O2）對MC3T3-E1細(xì)胞進(jìn)行不同時長的刺激，細(xì)胞增殖/毒性檢測(cell counting kit-8，CCK-8)實驗、實時聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）檢測細(xì)胞損傷、氧化應(yīng)激、成骨分化等標(biāo)志物以及microRNA的表達(dá)水平。2、根據(jù)前期

2、實驗結(jié)果，用0.3mM H2O2干預(yù)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化過程，堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性測定及染色鑒定細(xì)胞成骨分化水平、Real-time PCR檢測成骨標(biāo)志基因mRNA的表達(dá)水平，以此來觀察H2O2對成骨細(xì)胞分化能力的影響。3、干預(yù)MC3T3-E1細(xì)胞中miR-141或miR-200a的表達(dá)，并對其進(jìn)行H2O2刺激，Real-time PCR檢測細(xì)胞成骨分化標(biāo)志物的表達(dá)水平，鑒定miR-

3、141或miR-200a在該細(xì)胞株成骨分化過程中的潛在作用。4、采用FRAX(R)中國模式計算絕經(jīng)后女性在高糖應(yīng)激狀態(tài)下10年內(nèi)髖部骨折概率和主要骨質(zhì)疏松性骨折概率。
　　結(jié)果：1、在不同濃度及不同時長H2O2刺激下，MC3T3-E1細(xì)胞的死亡率出現(xiàn)顯著差異，呈時間-濃度依賴性。氧化應(yīng)激標(biāo)志物超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、DNA修復(fù)基因（growth arrest and DNA damage

4、45，Gadd45）皆發(fā)生不同程度的升高；成骨分化標(biāo)志物Runx2轉(zhuǎn)錄因子(runt-related transcription factor2，Runx2)、膠原酶I（collagenase I，Col-I）、ALP則發(fā)生明顯下降；miR-200a和miR-141表達(dá)水平出現(xiàn)顯著增高。2、對MC3T3-E1細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)，結(jié)果顯示：肉眼可見H2O2處理組的ALP染色較正常對照組有明顯差異,ALP活性顯著低于正常對照組。誘導(dǎo)至3、7天

5、H2O2處理組Runx2、Col-I、ALP的表達(dá)也低于正常對照組。表明H2O2刺激可降低MC3T3-E1細(xì)胞的成骨分化能力。3、與正常對照組相比，miR-141或miR-200a過表達(dá)組，成骨標(biāo)志性基因ALP、Runx2、Col-I表達(dá)水平略微下降，miR-141或miR-200a敲除組成骨標(biāo)志性基因ALP、Runx2、Col-I表達(dá)水平明顯升高。說明下調(diào)miR-141或200a的表達(dá)可以緩解氧化應(yīng)激對MC3T3-E1細(xì)胞功能的損傷。

6、4、與健康對照組相比，絕經(jīng)后女性在高糖應(yīng)激狀態(tài)下即所選取2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)患者的股骨頸（femoral neck，F(xiàn)N）骨密度(bone mineral density，BMD)和腰椎（lumber spine2-4，L2-4）BMD均顯著增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。但使用FRAX(R)評估的10年內(nèi)髖部骨折概率和主要骨質(zhì)疏松性骨折概率，在T2DM組和健康對照組之間無明顯