高鐵環(huán)境對人成骨細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞生物活性影響及相互作用.pdf

1、第一部分高鐵環(huán)境下人成骨細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)及氧化應(yīng)激的相互關(guān)系
　　目的：觀察高鐵環(huán)境（枸櫞酸鐵銨）對人成骨細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)、氧化應(yīng)激的影響，探討兩者之間的相互關(guān)系。
　　方法：人成骨細(xì)胞（hFOB1.19）培養(yǎng)后，用不同濃度枸櫞酸鐵銨（0umol/L、50umol/L、100umol/L、200umol/L）加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，用RT-PCR檢測成骨細(xì)胞鐵調(diào)節(jié)基因膜轉(zhuǎn)鐵蛋白（FPN1）、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TfR）和二價金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（DMT1

2、）的表達(dá)變化；激光共聚焦掃描顯微鏡（CLSM）觀察成骨細(xì)胞內(nèi)的鐵離子熒光強(qiáng)度；分別用丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒檢測成骨細(xì)胞MDA含量及SOD、GSH-PX活性；流式細(xì)胞儀檢測成骨細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平。
　　結(jié)果：在FAC干預(yù)48h后，與對照組相比，F(xiàn)PN1 mRNA的表達(dá)隨FAC干預(yù)濃度增加呈劑量依賴性上調(diào)，TfR、DMT1 mRNA的表達(dá)呈劑量依賴性下調(diào)（P<0.0

3、5）；FAC干預(yù)48h后成骨細(xì)胞內(nèi)鐵離子熒光強(qiáng)度劑量依賴性減弱，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；FAC干預(yù)48h后，成骨細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物MDA水平呈劑量依賴性升高，成骨細(xì)胞抗氧化物酶SOD及GSH-PX活性呈劑量依賴性降低，成骨細(xì)胞ROS水平隨FAC干預(yù)濃度增加呈劑量依賴性升高（P<0.05）；
　　結(jié)論：成骨細(xì)胞的鐵通道蛋白受環(huán)境鐵離子影響，在一定范圍內(nèi)隨著細(xì)胞外鐵離子濃度增加，成骨細(xì)胞鐵調(diào)節(jié)基因發(fā)生特異性改變，從

4、而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鐵離子濃度升高；隨著細(xì)胞內(nèi)鐵離子濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平也隨著相應(yīng)升高。
　　第二部分高鐵環(huán)境下人成骨細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)（活性氧）與成骨細(xì)胞生物活性指標(biāo)的相互關(guān)系
　　目的：了解高鐵環(huán)境（枸櫞酸鐵銨）對人成骨細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)（活性氧）、成骨細(xì)胞生物活性指標(biāo)變化，探討活性氧在“鐵過載與骨代謝”之間的作用。
　　方法：體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞，一組運(yùn)用200umol/L枸櫞酸鐵銨（FAC）干預(yù)（表示：鐵過載），一組

5、運(yùn)用2.5mmol/L N-乙酰半胱氨酸（NAC，抗氧化劑）干預(yù)（表示：抗氧化），一組NAC預(yù)處理1h后運(yùn)用相同濃度FAC干預(yù)（表示：抗氧化對鐵過載的作用），一組為正常對照；細(xì)胞培養(yǎng)48h后，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的水平；CCK-8法檢測各組成骨細(xì)胞活力情況；半定量RT-PCR法檢測各組細(xì)胞OPG、BGP和COL1 mRNA表達(dá)的變化；堿性磷酸酶活性試劑盒檢測各組細(xì)胞堿性磷酸酶活性。
　　結(jié)果：不同干預(yù)組成骨細(xì)胞

6、內(nèi)活性氧含量差異顯著不同（P<0.05），F(xiàn)AC組顯著高于對照組，F(xiàn)AC+NAC組低于FAC組、高于NAC組；各組間活性氧含量的變化與成骨細(xì)胞活力、OPG、BGP和COL1 mRNA表達(dá)光密度比值、堿性磷酸酶活性呈負(fù)相關(guān)性，組間比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：鐵過載可以降低成骨細(xì)胞生物活性，鐵過載可能促進(jìn)細(xì)胞活性氧水平增加，鐵過載環(huán)境下抗氧化劑可以降低活性氧水平、提高細(xì)胞生物活性；鐵過載降低成骨細(xì)胞生物活性可能與鐵過