脂肪來源干細胞復合聚己內(nèi)酯-殼聚糖修復膀胱缺損的實驗研究.pdf

1、目的：對比聚己內(nèi)酯/殼聚糖（Polycaprolactone/chitosan，PCL/CS）和聚己內(nèi)酯/聚乳酸（Polycaprolactone/ polylactic acid，PCL/PLA）的生物相容性；研究脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）復合PCL/CS，修復大面積膀胱缺損并探討其相關機制。
　　方法：①分離人ADSCs，制備PCL/CS，PCL/PLA復合支架，ADSC

2、s經(jīng)體外培養(yǎng)、擴增鑒定后，接種支架材料，裸鼠皮下培養(yǎng)2周，組織學鑒定其生物相容性，并取細胞相容性較好的支架行細胞毒性鑒定。②優(yōu)選細胞相容性較好的支架PCL/CS后，分離SD大鼠ADSCs，體外培養(yǎng)、擴增后，以CM-Dil熒光染料標記，接種PCL/CS，體外培養(yǎng)2天，對SD大鼠行大面積膀胱缺損修復，依此為實驗組；對照組為單純PCL/CS。術后4周組織學檢測膀胱缺損修復情況，免疫熒光檢測植入 ADSCs的轉(zhuǎn)歸情況。
　　結果：①通過冷

3、凍干燥技術以及真空熱交聯(lián)的方法制備的PCL/CS和PCL/PLA均具有疏松多孔結構，ADSCs復合支架裸鼠體內(nèi)培養(yǎng)2周后，大量細胞滲透到支架材料內(nèi)部，相對于PCL/PLA，PCL/CS支架可見到更多的ADSCs滲入其結構內(nèi)部，同時經(jīng)過HLA-Ⅰ抗體檢測后我們可發(fā)現(xiàn)，支架材料內(nèi)部分細胞呈現(xiàn)陽性表達，從而進一步說明PCL/CS支架內(nèi)該部分的細胞來源于人體，即人的脂肪來源干細胞ADSCs。ADSCs在PCL/CS浸提液中保持較高的增值率，PC

4、L/CS浸提液細胞毒性為0級，即無細胞毒性。②術后4周組織學檢測發(fā)現(xiàn)實驗組和對照組均有多層尿路上皮再生，而實驗組的平滑肌再生情況明顯優(yōu)于對照組，且實驗組大鼠具有更大的膀胱容積，免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)部分膀胱平滑肌細胞表達CM-Dil的紅色熒光，表明該部分平滑肌細胞由植入的ADSCs轉(zhuǎn)化而來。
　　結論：通過生物相容性實驗，我們得出：相對于PCL/PLA，PCL/CS具有更好的細胞相容性，且PCL/CS安全可靠且無毒，該支架可以作為種子細