殼聚糖-明膠復(fù)合網(wǎng)絡(luò)支架體內(nèi)修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：探討殼聚糖、明膠復(fù)合構(gòu)建關(guān)節(jié)軟骨組織工程網(wǎng)絡(luò)支架修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的能力，觀察支架材料對于兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生長及細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響，評估其作為組織工程學(xué)支架材料的優(yōu)點(diǎn)與不足，并與脫鈣去抗原的松質(zhì)骨修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的效果進(jìn)行對比。 方法：48只健康新西蘭大白兔，制雙膝關(guān)節(jié)股骨滑車關(guān)節(jié)面軟骨缺損動物模型，缺損直徑6mm，深達(dá)骨髓腔。按缺損處填充材料不同，分為A組(殼聚糖-明膠網(wǎng)絡(luò)復(fù)合材料)，B組(異體脫鈣去抗原松質(zhì)骨)

2、和C組(空白對照組)，術(shù)后于第4，8，12及16周時取材。進(jìn)行大體觀察，組織學(xué)檢測及修復(fù)軟骨番紅O染色灰度值測定。 結(jié)果：第4周時三組大體觀察均可見缺損處部分組織填充，邊界明顯，三組組織學(xué)評分及灰度值測定結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義。第8周時，A、B兩組大體觀察均可見缺損處組織填充完全，A組缺損區(qū)甚至略高于周圍軟骨組織，修復(fù)組織質(zhì)地韌，白色，有光澤，與周圍正常軟骨邊界不及4周時清晰。組織學(xué)觀察可見A組缺損區(qū)組織與鄰近正常組織基本齊平，修復(fù)組

3、織細(xì)胞以透明樣軟骨細(xì)胞為主，細(xì)胞體積小，可見散在同源細(xì)胞群，排列不規(guī)則，基質(zhì)染色接近正常軟骨，邊界仍可見。B組缺損區(qū)已無明顯凹陷，表層為較致密纖維組織層，纖維呈水平方向有序排列，深層組織中可見透明樣軟骨細(xì)胞，細(xì)胞體積小，細(xì)胞陷窩多，軟骨基質(zhì)較正?；|(zhì)稍淺，邊界漸模糊。C組缺損區(qū)凹陷明顯，修復(fù)組織細(xì)胞仍以梭形纖維細(xì)胞為主，細(xì)胞體積小，形狀狹長，同源細(xì)胞群少見，基質(zhì)量少，淡染，邊界清晰可辨。第12周時，A、B兩組大體觀察可見缺損區(qū)平整，為半

4、透明狀物質(zhì)填充，質(zhì)地韌，邊界模糊。組織學(xué)觀察示A組缺損區(qū)與鄰近正常組織齊平，表面光滑，修復(fù)細(xì)胞以透明樣軟骨細(xì)胞為主，細(xì)胞體積增大，基質(zhì)染色與正常軟骨基本一致，邊界難以分辨。B組缺損區(qū)表面平滑，修復(fù)細(xì)胞同樣以透明樣軟骨細(xì)胞為主，細(xì)胞密度降低，軟骨陷窩多，清晰，基質(zhì)染色與周邊軟骨基質(zhì)相比差別不明顯。C組缺損區(qū)表面為纖維樣組織覆蓋，其下可見部分類軟骨基質(zhì)，細(xì)胞體積小，形體狹長，基質(zhì)染色淺，邊界仍清晰可見。第16周時A、B兩組缺損區(qū)已完全為修復(fù)

5、組織所填充，修復(fù)組織顏色接近正常軟骨，組織學(xué)觀察可見A組缺損區(qū)完全為透明樣軟骨修復(fù)，表面平坦，軟骨細(xì)胞位于陷窩中，排列呈有序化傾向，基質(zhì)染色與正?；|(zhì)無異，修復(fù)組織與周圍正常軟骨組織結(jié)合緊密。軟骨厚度接近于正常軟骨，潮線連貫，軟骨下骨完全再生。B組缺損區(qū)與鄰近正常組織完全齊平，修復(fù)組織為透明樣軟骨組織，軟骨細(xì)胞數(shù)量仍較多，表層體積小，深層細(xì)胞逐漸加大，有序化傾向無直觀表現(xiàn)，基質(zhì)染色正常，缺損區(qū)與周圍組織結(jié)合緊密，軟骨厚度接近正常，潮線清

6、晰，軟骨下骨修復(fù)較完全。C組缺損區(qū)修復(fù)仍以纖維軟骨為主，表面欠平坦，邊界清晰，細(xì)胞密集，體積小，呈橢圓形或梭形，排列無續(xù)，軟骨基質(zhì)淡然，潮線未見，軟骨下骨仍缺失明顯。組織學(xué)評分及灰度值測定結(jié)果均顯示：于第8，第12周及第16周時，A、B、C三組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義，A、B兩組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：1.應(yīng)用冰凍干燥及各種調(diào)控技術(shù)制備的殼聚糖.明膠網(wǎng)絡(luò)復(fù)合支架做為一種新型組織工程細(xì)胞載體，具有良好的生物相容性和可降解性，能為細(xì)胞

7、提供優(yōu)良的三維生長空間，適合各種形狀和深度的損傷，其在關(guān)節(jié)軟骨缺損中的植入利于軟骨細(xì)胞的增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)的分泌，為軟骨組織工程載體的選擇拓寬了道路。 2.脫鈣去抗原的異種異體松質(zhì)骨做為經(jīng)典的組織工程學(xué)支架材料，消除了材料來源及生物相容性方面的缺陷，其立體結(jié)構(gòu)十分利于軟骨細(xì)胞附著，能為細(xì)胞生長提供優(yōu)良的微環(huán)境，可增強(qiáng)缺損區(qū)軟骨細(xì)胞的增殖能力并促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分泌，是一種很具潛力的軟骨組織工程學(xué)細(xì)胞載體。 3.此次實驗由于