p63基因在鼻咽癌中的表達及其分子機理的相關研究.pdf

1、鼻咽癌是一種在中國南方，東南亞及北非一些國家中高發(fā)的上皮惡性腫瘤。鼻咽癌的病因被認為與遺傳易感性、EB病毒感染以及其他一些環(huán)境因素密切相關。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的分型標準可將鼻咽癌分為角化性鱗狀細胞癌、分化型非角化性癌以及未分化型非角化性癌。在鼻咽癌高發(fā)地區(qū)——中國南方，90％的鼻咽癌患者均為未分化型非角化性癌，且?guī)缀跛形捶只头墙腔员茄拾┗颊呔鶖y帶有EB病毒感染。 p63是一個與p53有著高度同源性的p53家族新成員

2、，它與p53有著結構與功能上的相似性，同時也有許多不同之處。p63對于上皮細胞的發(fā)育和分化非常重要，同時，在許多腫瘤中都觀察到p63的高表達，尤其是那些分化程度低的惡性腫瘤。本研究的主要目的即為檢測p63在鼻咽癌中的表達并進一步對引起其高表達的機理進行探索。 本論文首先通過免疫組化在一張有248例鼻咽標本的組織芯片上研究了p63在鼻咽癌及鼻咽部非癌組織中的表達，結果發(fā)現(xiàn)p63在202例未分化非角化性鼻咽癌組織中100％呈陽性表達

3、，而在29例鼻咽炎癥組織及17例鼻咽癌旁上皮組織中為陰性表達。為了進一步明確p63表達與鼻咽癌不同分化程度之間的關系，我們分析了106例不同分化類型的鼻咽癌組織，其中有8例角化性鼻咽癌，48例分化型非角化性鼻咽癌和50例未分化型非角化性鼻咽癌。p63在所有的鼻咽癌標本都為陽性表達，且p63陽性表達的強度與鼻咽癌的分化程度密切相關。p63在角化性鼻咽癌、分化型非角化性鼻咽癌及未分化型非角化性鼻咽癌中的強陽性表達率分別為62.5％(5/8)

4、、92.5％(43/48)、及100％(50/50)。在角化性鼻咽癌及非角化性鼻咽癌中存在顯著性差異(p=0.001)。 在明確了p63在鼻咽癌中呈陽性表達以及其表達強度與鼻咽癌分化程度密切相關之后，我們對其高表達的分子機理進行了進一步的探討。首先，我們對p63基因進行了突變分析，看其是否因為基因突變喪失活性，導致蛋白質(zhì)結構發(fā)生改變，聚集在核內(nèi)而呈現(xiàn)出高表達。由于鼻咽組織的復雜性，我們對鼻咽癌組織標本采取了克隆測序的策略。而對其

5、匹配的血標本采取PCR直接測序的方法。通過對p63基因14個外顯子的測序，我們均未發(fā)現(xiàn)其在鼻咽癌中有突變發(fā)生，說明p63在鼻咽癌中的高表達并非由其基因突變所導致。 p63基因在鼻咽癌中沒有發(fā)生突變，說明p63的高表達可能另有原因。在以往的研究中，人們發(fā)現(xiàn)p53蛋白在一些腫瘤中可能因為與病毒編碼的蛋白質(zhì)相互作用而導致活性喪失，從而導致p53呈現(xiàn)出高表達。另一方面，EB病毒感染被證實與鼻咽癌的發(fā)生有著密切聯(lián)系。而有報道稱EBNA-5

6、與p53能在細胞核內(nèi)發(fā)生相互作用。因此，我們對p63和ENBNA-5進行了免疫共沉淀試驗，證實了二者在鼻咽癌細胞內(nèi)能相互結合。同時，我們對攜帶有EBV及未攜帶EBV的細胞株進行了半衰期分析，發(fā)現(xiàn)有EBV的細胞株中p63的半衰期明顯高于沒有EBV的細胞株，說明p63與EBNA-5的結合可能是導致p63在鼻咽癌中呈現(xiàn)高表達的原因。 此外，我們還用半定量RT-PCR對p63不同異構體在鼻咽癌中的表達進行了分析，發(fā)現(xiàn)TA-和△N-型p6

7、3這兩大類異構體在mRNA水平上均有表達，但△Np63的表達占主導地位。我們還應用染色質(zhì)免疫共沉淀方法(chromatinimmunoprecipitationassay，ChIP)對p63下游因子進行了分析。ChIP結果表明p63作為一個轉(zhuǎn)錄因子，能與p21以及14-3-3σ的啟動子區(qū)域結合，從而對其起到一定的調(diào)控作用。 本研究觀察到p63在鼻咽癌中有高度表達，且其表達強度與鼻咽癌分化程度密切相關。免疫共沉淀試驗證實p63能在