IκBα超抑制蛋白基因轉染對急性肺損傷小鼠的治療作用.pdf

1、急性肺損傷(Acutelunginjury，ALI)是由感染等多種因素引起的以中性粒細胞浸潤為主的肺組織的炎癥反應。以促炎因子/抗炎因子失衡為特征的過度全身炎癥反應，是危重病患者發(fā)生急性肺損傷的重要機制。核因子-κB(nuclearfactor-kappaB，NF-κB)是炎癥相關多種細胞因子、黏附分子表達的一個關鍵性轉錄調控因子，NF-κB的活化與急性肺損傷發(fā)病關系密切，阻斷NF-κB活化有可能是治療急性肺損傷的重要手段。NF-κB抑

2、制蛋白(inhibitoryNF-κB，IκB)是NF-κB的特異性抑制物，研究表明，第32位和第36位絲氨酸發(fā)生突變的IκBα不會被降解，與NF-κB發(fā)生不可逆性結合，發(fā)揮超抑制屬性。本研究克隆了中國人IκBα基因，誘變、構建NF-κB的超抑制物IκBαM重組腺病毒表達載體，觀察其對ALI中NF-κB抑制作用，為將來臨床應用IκBα轉基因治療急性肺損傷提供實驗依據(jù)。 研究方法： 1.應用脂多糖(LPS)誘導制備小鼠急性

3、肺損傷模型，凝膠滯留電泳法(EMSA法)檢測NF-κB在脂多糖誘發(fā)的急性肺損傷中的動態(tài)表達。 2.應用RT-PCR從外周血單核細胞克隆中國人IκBα基因，并對其S32和S36位絲氨酸密碼子進行定點突變，構建pShuttle/IκBαM真核表達載體。 3.在以上工作基礎上，進一步構建Ad-IκBαM重組腺病毒載體。 4.在小鼠急性肺損傷模型中運用Ad-IκBαM治療，通過ELISA、免疫組化等方法觀察基因治療對NF

4、-κB及炎性肺損傷的抑制作用。 研究結果： 1.NF-κB在脂多糖誘發(fā)的急性肺損傷中呈動態(tài)表達。脂多糖腹腔注射后NF-KB表達在3小時時達到高峰，隨后開始下降。 2.成功克隆了中國人IκBα基因，并對其S32和S36位絲氨酸密碼子進行定點突變，進一步構建了Ad-IκBαM重組腺病毒表達載體。 3.腺病毒載體可以感染肺內的主要細胞(肺泡上皮細胞)，并高效表達目的基因。 4.通過Ad-IκBαM轉基因