大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞exosome對(duì)自身心肌分化及抗凋亡實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究經(jīng)5-氮雜胞苷（5-aza）誘導(dǎo)或低氧培養(yǎng)后，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow Mesenchymal stem cells，BM-MSCs）分泌的外泌體（exosome）對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化或抗凋亡能力的影響，并探討exosome發(fā)揮心肌保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法：取6周齡SD大鼠的脛骨及股骨分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，用全骨髓差異貼壁法培養(yǎng)及純化MSCs，并取第6代MSCs用于實(shí)驗(yàn)，分別提取正常培養(yǎng)的BM-

2、MSCs分泌的exosome（BM-MEX）、低氧培養(yǎng)的BM-MSCs分泌的exosome（hypoEX）及5-aza誘導(dǎo)的BM-MSCs分泌的exosome（5-azaEX）用于體外研究。體外實(shí)驗(yàn)：（1）將BM-MEX和hypoEX分別加入到含血清的大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)基中，置于5%低氧培養(yǎng)箱，72h后用利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率；（2）將BM-MEX和5-azaEX分別加入到大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基中，2周后通過(guò)免疫熒光染色

3、比較上述兩組細(xì)胞與心肌細(xì)胞的肌鈣蛋白T（cTnT）、結(jié)蛋白（Desmin）、α-肌動(dòng)蛋白（α-actin）表達(dá)情況；通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)以上三組細(xì)胞的cTnT、Desmin、α-actin、GATA4及Nkx2.5的基因相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：（1）hypoEX組與BM-MEX組及陽(yáng)性對(duì)照組相比，心肌細(xì)胞凋亡率均明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而B(niǎo)M-MEX組與陽(yáng)性對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（2）

4、心肌細(xì)胞的α-actin、Desmin、cTnT、GATA-4、Nkx2.5基因表達(dá)量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于5-azaEX組及BM-MEX組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；5-azaEX組細(xì)胞的上述5種基因表達(dá)量均稍高 BM-MEX組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：（1）低氧培養(yǎng)的BM-MSCs所分泌的exosome能在體外減少缺氧環(huán)境下心肌細(xì)胞的凋亡率；而未經(jīng)低氧處理的則不能降低心肌細(xì)胞凋亡率。（2）5-aza誘導(dǎo)的BM