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文檔簡介
1、一、研究目的:
目前缺乏特異的D1、D5受體激動劑和拮抗劑,尚不能確定D1類受體對心肌肥大的影響是經(jīng)由D1或D5受體發(fā)揮作用的。因而,本實驗采用多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam干預(yù)由去甲腎上腺素(NE)誘導的H9C2細胞肥大,并以反義核苷酸技術(shù)抑制D5受體的表達,從基因表達、細胞蛋白合成速率等角度探討多巴胺D5受體在心肌肥大中的作用,為心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展提供依據(jù)。
二、研究內(nèi)容:
1.用不同濃度的
2、NE作用于H9C2細胞,觀察NE對H9C2細胞肥大的促進作用。
2.用不同濃度的多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam作用于H9C2細胞,觀察fenoldopam對H9C2細胞本身有無作用。
3.觀察NE與fenoldopam同時存在的情況下,H9C2細胞的肥大作用有無發(fā)生改變,如果H9C2細胞的肥大作用發(fā)生改變,那么多巴胺D1類受體激動劑是否通過D5對NE促H9C2細胞的肥大作用產(chǎn)生影響。
4.觀察D
3、5反義核苷酸抑制D5受體的表達,由此來判斷多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam對NE誘導H9C2細胞肥大作用是否通過D5受體發(fā)揮作用。
三、研究方法:
采用[3H]-亮氨酸摻入法測定細胞蛋白含量及RT-PCR檢測ANF的mRNA表達的水平作為檢測心肌肥大的標志,以及利用RT-PCR的方法檢測多巴胺D5反義核苷酸處理后,D5mRNA的改變。
四、研究結(jié)果:
1.NE作用H9C2細胞48h,在1
4、0-9~10-6mol/L范圍內(nèi),可顯著促進細胞蛋白合成,呈濃度依賴性對H9C2細胞的促肥大作用。
2.多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam本身對H9C2細胞并無促肥大作用。但在fenoldopam與NE同時存在的情況下,NE對H9C2細胞促肥大作用則被抑制。
3.多巴胺D5反義核苷酸抑制D5受體的表達。
4.多巴胺D5反義核苷酸阻斷了fenoldopam對NE促H9C2細胞肥大的抑制作用。
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