Notch信號在雞卵泡形成和發(fā)育中作用的研究.pdf

1、原始卵泡是卵泡發(fā)育的起始，其數(shù)量的多少也是母雞產(chǎn)蛋量多少的重要前提之一。對原始卵泡的研究，有助于從源頭上增加產(chǎn)蛋母雞卵泡的數(shù)量，從而可以增加母雞用于產(chǎn)蛋的卵泡庫。目前對原始卵泡形成的研究主要集中在哺乳動物上，而在鳥類上的研究較少。因此本實驗以海蘭雛雞為研究材料，主要的研究內(nèi)容有如下兩個方面:①探索出殼后一個月內(nèi)小母雞卵泡發(fā)育的動態(tài)變化規(guī)律;②明確Notch信號相關(guān)基因在卵泡形成前后的變化，并進一步探究Notch信號在原始卵泡形成過程中的

2、作用。
　　1.卵泡發(fā)育動態(tài)規(guī)律的觀察
　　本研究以出殼后一個月內(nèi)海蘭小母雞為研究對象，旨在探究卵泡在這一時期的動態(tài)變化規(guī)律。通過HE染色等方法對出殼后一個月內(nèi)小母雞卵巢的形態(tài)學分析。結(jié)果顯示，原始卵泡形成開始于H4，初級卵泡第一次出現(xiàn)在H7，次級卵泡應在H21左右形成。通過卵泡的數(shù)量統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，在出殼后一個月內(nèi)，與仍然在生殖細胞簇中的卵母細胞相比，形成卵泡的卵母細胞僅占少數(shù)。原始卵泡的數(shù)量在H14左右呈下降趨勢，在H21又恢

3、復至H7的水平。初級卵泡的數(shù)量在H14有明顯的上升趨勢，在H21的變化不明顯，在H28呈下降趨勢。次級卵泡在H21有少量的形成，在H28形成加快。但是在這段時間內(nèi)，單位面積(100×100μm2)內(nèi)生殖細胞簇的數(shù)量并無明顯下降趨勢。對單個生殖細胞簇中生殖細胞計數(shù)發(fā)現(xiàn)，生殖細胞簇含有的生殖細胞大多數(shù)在17個以下。通過RT-PCR發(fā)現(xiàn)，早期減數(shù)分裂相關(guān)的基因——Stra8、Dmc1、Spo11、Scp3在出殼后一個月內(nèi)和八月齡的母雞卵巢中均

4、有表達。這說明出殼后的母雞中仍有進行減數(shù)分裂的可能。綜上所述，隨著母雞的發(fā)育，除原始卵泡外，各級卵泡在形成后一周左右有加速發(fā)育的趨勢，而同時原始卵泡和初級卵泡的數(shù)量會因為下一級卵泡的形成和發(fā)育而出現(xiàn)一定的下降趨勢，但之后不久就會恢復起初的水平。在這一時間段內(nèi)，無論是生殖細胞簇的數(shù)量，還是生殖細胞簇中的卵母細胞的百分比均沒有明顯的變化。單個生殖細胞簇中的生殖細胞的數(shù)量也無明顯變化。
　　2.Notch信號在原始卵泡形成中的作用

5、>　　雌性動物在出生前后或出殼后，其卵巢中會出現(xiàn)一個重要事件——生殖細胞簇的破裂和原始卵泡的形成。之前的研究發(fā)現(xiàn)有許多的因子參與這一過程。Notch信號是其中作用非常明顯的一種。本研究以雛雞為研究模型，通過對其卵巢體外培養(yǎng)等方法，探究Notch信號在原始卵泡形成和發(fā)育過程中的作用。結(jié)果顯示，Notch信號在原始卵泡形成前后表達變化明顯。Jag2的表達量在所選的時間段內(nèi)均呈上升趨勢(相對于H0)，其余受體、配體和靶基因隨著發(fā)育階段的不同而

6、呈現(xiàn)不同的變化。在卵巢體外培養(yǎng)體系中加入DAPT(Notch抑制劑)后，通過形態(tài)學分析發(fā)現(xiàn)，卵泡的數(shù)量明顯減少，生殖細胞簇的數(shù)量明顯增多。進一步利用RT-PCR和Western Blot分析發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt信號通路的相關(guān)基因和蛋白亦受到減弱的Notch信號的抑制，但Pten的表達呈顯著上升。與Notch信號相關(guān)的E-cadherin和N-cadherin的表達都隨著Notch信號的減弱而呈顯著的下降。Notch信號的直接下游基因之

7、一c-myc的表達也因Notch信號的抑制而下調(diào)。此外，當Notch信號被抑制后，還會下調(diào)一些如卵泡形成有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的表達，如Ahr、Nobox等。綜上所述，Notch信號可能是通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號通路的活性、鈣黏蛋白的表達以及一些轉(zhuǎn)錄因子的表達來影響雞原始卵泡的形成。
　　本研究一方面探索了卵泡發(fā)育的動態(tài)規(guī)律，并發(fā)現(xiàn)生殖細胞簇在出殼后一個月內(nèi)變化不明顯的現(xiàn)象。另一方面研究了Notch信號相關(guān)基因在卵巢中表達變化規(guī)律，并