一例人體寄生包蟲以及我國不同地區(qū)包蟲的鑒定.pdf

1、棘球絳蟲的中間宿主十分廣泛,包括人、家畜及野生動(dòng)物如牦牛、藏羊、鼠及駱駝等,引起重要的人獸共患寄生蟲病--包蟲病。我國廣大牧區(qū)動(dòng)物種群龐大,種類復(fù)雜,西北地區(qū)由于地理位置特殊,是高海拔、低氣壓的寒冷地域。以畜牧業(yè)為主的縣、市、自治州都是棘球蚴病的高發(fā)地區(qū)。2006年在青海省治多縣的棘球蚴病調(diào)查結(jié)果顯示:ELISA檢測(cè)931份人血清,抗體陽性者76例,陽性率為8.2％.由于我國政府的高度重視及大力控制,人和家畜棘球蚴感染率在某些地區(qū)逐年下

2、降,但在一些特定地區(qū),如某些少數(shù)民族有特殊的宗教習(xí)俗,導(dǎo)致其終宿主犬類種群數(shù)量明顯增加,包蟲病成為嚴(yán)重的地方性流行病。此外,隨著交通條件的改善,經(jīng)濟(jì)貿(mào)易頻繁,人員流動(dòng)大,大量疫區(qū)犬和家畜向外輸出,勢(shì)必加重棘球蚴病的流行。 棘球絳蟲的幼蟲是人、畜包蟲病的病原體,棘球絳蟲在動(dòng)物分類學(xué)上屬于絳蟲綱(Cestoda)、圓葉目(Cyelophyllidea)、帶科(Taeniidae)、棘球絳蟲屬(Genus Echinococcus)。

3、該屬現(xiàn)有4個(gè)公認(rèn)獨(dú)立的種,即細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus)、多房棘球絳蟲(E.multilocularis)、少節(jié)棘球絳蟲(E.oligarthrus)、福氏棘球絳蟲(E.vogeli),后兩者主要分布在美洲,國內(nèi)尚未見報(bào)道。此外,我國唐崇惕院士收集了我國內(nèi)蒙古東北部動(dòng)物體內(nèi)的棘球絳蟲,經(jīng)過多年的生物學(xué)研究,將原名多房棘球絳蟲西伯利亞亞種(E.multilocularis sibiricensis)修訂為

4、西伯利亞棘球絳蟲(E.sibiricensis),將原名棘球絳蟲哈薩克亞種(E.m.kazakhensis)修訂為蘇俄棘球絳蟲(E.russicensis),將原名多房棘球絳蟲指名亞種(E.m.multilocularis)修訂為多房棘球絳蟲(E.multilocularis)。上世紀(jì)90年代在我國四川和青海動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的棘球絳蟲,因其成蟲與幼蟲形態(tài)特殊,根據(jù)分子序列不同命名為石渠棘球絳蟲(E.shiquicus)。 2006年

5、我校附屬醫(yī)院發(fā)現(xiàn)一例來自新疆被診斷為小網(wǎng)膜腫瘤的病人,從切除的腫塊剖面見有呈蜂窩狀的“粉皮樣”結(jié)構(gòu),類似棘球蚴,但其大體結(jié)構(gòu)和組織形態(tài)與常見棘球蚴囊有所不同,未見原頭節(jié)等特點(diǎn)。懷疑為多房棘球絳蟲,或未知種類棘球?qū)儆紫x感染。 為探明該患者腫塊的性質(zhì),以及我國不同地區(qū)新命名的棘球絳蟲的相互關(guān)系,本研究以福爾馬林固定的病人手術(shù)切除標(biāo)本(CHEm)和采自新疆細(xì)粒棘球蚴病人手術(shù)切除標(biāo)本(XJ-Eg)、小鼠保種的多房棘球蚴伊犁株(YL-Em

6、)、采自四川石渠縣的兩種動(dòng)物宿主肝臟的未定種包蟲：高原鼠兔肝臟標(biāo)本(133、317)和青海田鼠肝臟標(biāo)本(422、450),以及采自內(nèi)蒙的3種多房棘球絳蟲在小鼠腹腔保種的酒精浸泡標(biāo)本：西伯利亞棘球絳蟲(E.sibiricensis,標(biāo)本號(hào)I)、蘇俄棘球絳蟲(E.russicensis,標(biāo)本號(hào)II)、多房棘球絳蟲(E.multilocularis,標(biāo)本Ⅲ)為材料,以分子生物學(xué)方法對(duì)不同來源標(biāo)本進(jìn)行鑒定。此外,還對(duì)本校附屬醫(yī)院發(fā)現(xiàn)的病人標(biāo)本先

7、后進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、ELISA、免疫組化和部分分子標(biāo)志測(cè)序分析。該“腫塊”組織大小10 cm×6 cm×9 cm,剖開腫塊擠壓出“膠凍”樣成分,肉眼見為多囊結(jié)構(gòu),“粉皮”樣組織呈層疊迂回分布,有些呈蜂巢狀；顯微鏡下觀未見原頭節(jié),生發(fā)層襯于“粉皮”的一側(cè),有些在兩側(cè),有些不連續(xù)。周圍結(jié)締組織中可見散在深染的胚細(xì)胞；用多房棘球蚴囊液抗原對(duì)病人血清進(jìn)行ELISA檢測(cè)呈強(qiáng)陽性；用兔抗細(xì)粒棘球蚴囊液的多克隆抗體進(jìn)行免疫組化分析,可見陽性反應(yīng)的棕黃色位

8、于粉皮樣結(jié)構(gòu)的一側(cè)、雙側(cè)、壞死組織和周圍組織中。 采用真核生物18S核糖體小亞基(18S rRNA)序列通用引物(1520RPL、FPL)對(duì)各標(biāo)本基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,所得片段的序列與GenBanK中已有序列比對(duì)。結(jié)果CHEm標(biāo)本PCR擴(kuò)增序列與細(xì)粒棘球絳蟲18S rRNA序列相似性93％；用根據(jù)細(xì)粒棘球絳蟲線粒體ND1序列設(shè)計(jì)的引物(ND1、ND1r)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),CHEm ND1序列與細(xì)粒棘球絳蟲最

9、為接近,序列相似性為99％。其余各地標(biāo)本XJ-Eg、YL-Em、450、422、317、133、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的18S rRNA序列經(jīng)與GenBanK中已有序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)均與細(xì)粒棘球絳蟲相似性最高,分別為：97％、92％、93％、93％、92％、92％、92％、93％、93％；ND1序列與GenBanK中已有序列比對(duì),結(jié)果分別為:XJ-Eg與細(xì)粒棘球絳蟲ND1序列相似性最高為99％；422、450與多房棘球絳蟲ND1序列相似性最高為99％；

10、317、133ND1序列與石渠棘球絳蟲序列相似性為98％；標(biāo)本Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ與多房棘球絳蟲ND1序列相似性均為98％。 結(jié)合免疫組化結(jié)果,認(rèn)為CHEm為細(xì)粒棘球蚴非正常寄生或變異型?？赡茉摪x生長在胃壁外,血供較差,與在組織內(nèi)寄生時(shí)內(nèi)環(huán)境有一定差異。用1520RPL、FPL引物對(duì)標(biāo)本擴(kuò)增所得3條18S序列,比對(duì)結(jié)果均與細(xì)粒棘球絳蟲18S序列相似性最高(GenBanK中尚未收錄除細(xì)粒棘球絳蟲以外的棘球?qū)俳{蟲18S rRNA序列)。根據(jù)

11、ND1序列比對(duì)結(jié)果,本研究不同地區(qū)的標(biāo)本可分為以下四組：第一組為內(nèi)蒙古大興安嶺的3種多房棘球絳蟲(標(biāo)本號(hào)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),在系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹中的位置單成一組,與多房棘球絳蟲近緣；第二組多房棘球絳蟲,標(biāo)本號(hào)為YL-Em、450、422;第三組石渠棘球絳蟲,標(biāo)本號(hào)為317、133;第四組細(xì)粒棘球絳蟲,即XJ-Eg,CHEm也歸在此組中。 本研究先后用真核生物通用引物擴(kuò)增相對(duì)保守的18S序列,用棘球?qū)偬禺愐飻U(kuò)增線粒體ND1序列,成功地區(qū)分