中國人非小細(xì)胞肺癌PIK3CA基因突變及FGFR融合基因研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 中國人非小細(xì)胞肺癌PIK3CA基因突變研究
　　肺癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，在腫瘤相關(guān)死亡率中居首位。其中，約85％是非小細(xì)胞肺癌，主要包括鱗狀細(xì)胞癌、腺癌和大細(xì)胞癌等。近來年，盡管外科手術(shù)治療、腫瘤含鉑化療和以吉非替尼、厄羅替尼為代表的靶向治療等取得了長足的發(fā)展，但全球范圍內(nèi)非小細(xì)胞肺癌的5年生存率仍只有10％-15％。研究表明，磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路與腫瘤生

2、成密切相關(guān)。靶向于PI3K通路成員的抑制劑被證明有明顯抗腫瘤作用并已進(jìn)入臨床試驗(yàn)。然而，對(duì)PIK3CA基因突變、擴(kuò)增以及PI3K P110α，p-Akt，mTOR，PTEN表達(dá)的綜合分析罕有報(bào)道。中國人非小細(xì)胞肺癌PIK3CA基因突變及與其他驅(qū)動(dòng)癌基因突變關(guān)系仍不很清楚。弄清以上問題，將有利于了解中國人群PIK3CA基因突變現(xiàn)狀并有助PI3K靶向藥物患者選擇。
　　基于以上情況，我們開展本部分研究，回顧分析復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院11

3、17例臨床肺癌手術(shù)切除新鮮冰凍標(biāo)本，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因測(cè)序檢測(cè)PIK3CA（9號(hào)外顯子和20號(hào)外顯子），EGFR(18-21號(hào)外顯子)，KRAS（2號(hào)和3號(hào)外顯子），HER2(18-21號(hào)外顯子)，BRAF(11-15號(hào)外顯子)，AKT1(2-3號(hào)外顯子)的基因突變以及ALK(EML4-ALK, KIF5B-ALK和TFG-ALK)基因融合情況。對(duì)研究中發(fā)現(xiàn)的PIK

4、3CA突變標(biāo)本及野生PIK3CA對(duì)照標(biāo)本（連續(xù)收集自2008年7月至2009年6月肺鱗癌、腺癌野生PIK3CA樣本），以熒光原位雜交(fluorescent in situhybridization，F(xiàn)ISH)法檢測(cè)PIK3CA基因拷貝數(shù)，以免疫組織化學(xué)法（immunohistochemical，IHC）檢測(cè)PI3K P110α，p-Akt，mTOR和PTEN的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，1117例非小細(xì)胞肺癌中共有34例PIK3CA基因突變，80

5、7例腺癌和310例鱗癌中PIK3CA的突變頻率分別為2.7％和3.9％。在34例PIK3CA突變中，17例伴EGFR突變，4例伴KRAS突變。PIK3CA基因突變與PI3K P110α(p=0.0001)，p-Akt(p=0.024)以及mTOR(p=0.001)表達(dá)呈正相關(guān)，但與PIK3CA基因拷貝數(shù)無明顯相關(guān)性(p=0.463)。僅存在PIK3CA突變患者的總生存時(shí)間較PIK3CA-EGFR/ KRAS共突變者明顯縮短(p=0.00

6、4）。在無GFR/ KRAS突變的亞組，PIK3CA突變提示預(yù)后不良。
　　本部分研究成果表明，中國人非小細(xì)胞肺癌患者PIK3CA基因突變多合并有EGFR或KRAS突變;單一PIK3CA突變提示預(yù)后不良;無EGFR/KRAS突變亞組PIK3CA突變提示預(yù)后不良。本課題的研究結(jié)果可以對(duì)臨床肺癌癌基因驅(qū)動(dòng)突變篩選提供參考，有利于PIK3CA靶向藥患者選擇及判斷預(yù)后，具有臨床實(shí)用性。
　　第二部分 中國人非小細(xì)胞肺癌FGFR融合基

7、因研究
　　肺癌是世界范圍內(nèi)最常見的癌癥致死原因，占所有腫瘤死亡病例的約18％。其中，非小細(xì)胞肺癌占所有肺癌的85％左右，大部分非小細(xì)胞肺癌患者在被發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期從而失去手術(shù)根治的機(jī)會(huì)。隨著對(duì)非小細(xì)胞肺癌遺傳學(xué)研究的深入，針對(duì)特定驅(qū)動(dòng)突變的靶向藥物已被證明可以使腫瘤產(chǎn)生明顯的消退，并顯著延長患者無疾病生存期。近來，致癌融合基因如RET融合基因抑制劑凡德他尼(Vandetanib)和卡博替尼(Cabozantinib)，ALK與RO

8、S1融合基因抑制劑克唑替尼(Crizotinib)已被證明可有效治療特定亞型的肺癌。但是，東亞人群中，仍然有30％的吸煙肺腺癌和88％的肺鱗癌尚沒有明確驅(qū)動(dòng)基因突變/融合。新近研究表明，成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGFR)融合基因與腫瘤生成密切相關(guān)，靶向于FGFR的抑制劑有明顯抗腫瘤作用并已進(jìn)入前期臨床試驗(yàn)。然而對(duì)非小細(xì)胞肺癌FGFR融合基因及與其他驅(qū)動(dòng)基因關(guān)系的研究罕有報(bào)道，中國人非小細(xì)胞肺癌FGFR基因融合情況仍不十分清楚。弄清以上問

9、題，將有利于了解中國人群FGFR融合基因現(xiàn)狀并有助于FGFR靶向藥物患者選擇。
　　本項(xiàng)研究第二部分回顧分析復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1328例臨床非小細(xì)胞肺癌手術(shù)切除新鮮冰凍標(biāo)本，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行RT-PCR。直接測(cè)序檢測(cè)FGFR1，F(xiàn)GFR2, FGFR3基因融合情況，并分析患者EGFR,KRAS,HER2和BRAF突變、ALK、 RET、 ROS1融合基因情況以及患者臨床病理特征。對(duì)研究中發(fā)現(xiàn)的FGFR融合基因突

10、變標(biāo)本與野生FGFR對(duì)照標(biāo)本（連續(xù)收集自2011年7月至2012年12月的肺鱗癌樣本），以免疫組織化學(xué)法（immunohistochemical，IHC）檢測(cè)FGFR1，F(xiàn)GFR2, FGFR3表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，1328例非小細(xì)胞肺癌中有17例FGFR融合基因，其中15例為FGFR3-TACC3，2例為BAG4-FGFR1，并且與其他基因突變/融合不共存。有吸煙史(p＜0.001)，腫瘤直徑＞3cm(p＜0.001)的男性(p=0.002

11、)鱗癌(p＜0.001)患者更易出現(xiàn)FGFR基因融合，腺癌FGFR融合基因樣本中多含實(shí)體亞型。FGFR融合基因狀態(tài)與免疫組織化學(xué)表達(dá)呈正相關(guān)，F(xiàn)GFR基因融合與患者的總生存時(shí)間以及無復(fù)發(fā)生存時(shí)間無明顯相關(guān)性。
　　本課題的研究成果表明，中國人群中1.3％的非小細(xì)胞肺癌、3.5％的肺鱗癌中存在FGFR基因融合。腫瘤最大徑大于3厘米的吸煙鱗癌患者更易出現(xiàn)FGFR融合基因。本課題的研究結(jié)果可以對(duì)臨床肺癌癌基因驅(qū)動(dòng)基因突變/融合篩選提供參