乳腺癌組織中PIK3CA、KRAS及BRAF基因突變熱點區(qū)域的序列分析.pdf

1、乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一,嚴重影響女性的身心健康甚至危及生命,隨著細胞生物學及分子生物理論和技術(shù)的發(fā)展,現(xiàn)已認識到基因突變在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著非常重要的作用。目前已證實多種基因在乳腺癌的早期診斷及預后判斷等方面有著重要的意義。
　　PIK3CA是PI3Ks家族的關(guān)鍵成員,是染色體3q26.3上一段長度為34 kb的基因,由20個外顯子組成,編碼1068個氨基酸組成的p110α催化亞單位。PIK3CA基因是一種

2、癌基因,在多種人類腫瘤中存在突變。近幾年來已有數(shù)篇報道指出PIK3CA基因在結(jié)腸癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等多種腫瘤中發(fā)生了高頻體細胞突變。研究發(fā)現(xiàn)PIK3CA基因突變,是除了HER2基因擴增、p53基因突變之外乳腺癌最常見的基因突變之一。
　　KRAS基因是RAS家族的成員之一,位于12號染色體短臂上,長度為35 kb,是表皮生長因子受體的下游分子,KRAS基因含有4個編碼外顯子和1個5’端非編碼外顯子,共同編碼含有189個

3、氨基酸組成的RAS蛋白,在RAS基因家族中,KRAS對人類惡性腫瘤的影響最大,約30％的人類腫瘤中檢測到了RAS基因的突變。
　　BRAF基因是在人類尤文氏肉瘤中發(fā)現(xiàn)并克隆確認的能傳染NIH3T3細胞并且具有活性的DNA序列,位于7q34染色體,長度約190 kb,有功能的編碼區(qū)由2150對堿基組成,該基因是 Ras-Raf-MEK-ERK信號轉(zhuǎn)到通路非常重要的轉(zhuǎn)導因子,人類惡性腫瘤中約有7%-8%發(fā)生了 BRAF基因突變,其突變

4、位點主要位于第11和第15外顯子上,最常見的是V600E突變。近年來研究表明,BRAF基因的突變狀態(tài)能夠預測且對抗EGFR治療產(chǎn)生影響,從而影響到乳腺癌患者的預后情況,BRAF基因可作為乳腺癌研究中一個非常重要的靶點。
　　迄今為止,對于乳腺癌基因突變的研究大多是針對西方高加索人群,而對中國乳腺癌患者的基因突變的研究較少。然而,腫瘤的發(fā)生是一個多因素、多階段、多基因變異累計的復雜過程,基因的突變頻率、突變位點在不同種族,不同人群中

5、也存在著一定的差異,因此,本研究旨在對中國女性乳腺癌組織中PIK3CA、KRAS、BRAF基因突變熱點區(qū)域的檢測,分析這三種基因突變熱點區(qū)域的突變情況。
　　本研究針對從淮北市礦工總醫(yī)院收集來的女性乳腺癌標本進行基因組DNA的提取,分別對PIK3CA基因、KRAS基因、BRAF基因突變熱點區(qū)域進行PCR擴增,并對擴增產(chǎn)物進行測序分析,得到結(jié)果:本研究所搜集的26例乳腺癌患標本中發(fā)現(xiàn):1、8例 PIK3CA基因的突變,突變頻率為30

6、%。第9外顯子的突變1例(G1633A);第20外顯子的突變7例(A3140G),其中1例在A3140G突變的同時還發(fā)現(xiàn)了一個新的突變位點A3134C。2、6例KRAS基因突變,突變頻率為23%,突變位點均位于 KRAS基因熱點突變區(qū)域第2外顯子C100A。3、5例BRAF基因突變,突變頻率為19%,突變位點均位于BRAF基因熱點突變區(qū)域第15外顯子G1808C。4、其中有1例侵潤性導管癌的組織標本中同時出現(xiàn)了PIK3CA基因突變和KR