RAD001對PIK3CA基因及KRAS基因不同類型人肺NSCLC細胞放射增敏作用研究.pdf

1、目的：探討mTOR 蛋白抑制劑RAD001在NSCLC 放療中的作用，研究其放射增敏作用與PIK3CA基因和KRAS基因狀態(tài)的關系。
　　 方法：體外培養(yǎng)EGFR 野生型酪氨酸激酶抑制劑（TKI）耐藥的人肺非小細胞肺癌細胞株，其中NCI-H661細胞為PIK3CA和KRAS基因雙野生型，NCI-H460細胞為PIK3CA和KRAS基因雙突變型。應用MTT 法分別檢測RAD001 對兩株細胞的半數(shù)抑制濃度（IC50），確定藥物增敏

2、劑量。應用RAD001 作用24h后聯(lián)合及單獨進行X線0、2、4、6、8Gy 照射，分別計算兩株細胞克隆存活分數(shù)，多靶單擊模型擬合生存曲線，計算D0、Dq、SF2 及SER 參數(shù)。應用免疫熒光共聚焦分別觀察兩株細胞RAD001干預組及單純照射組X線4Gy 照射后0m、30m、60m、4h、12h、24hγ-H2AX 蛋白表達變化情況。應用western blot 進行p-p70S6K 及γ-H2AX 蛋白檢測及灰度值定量。
　　

3、 結果：MTT 法檢測RAD001 對兩株細胞的半抑制濃度(IC50)分別為：NCI-H661(23.101±0.056)nM和NCI-H460 (61.894±0.049)nM，經加權概率法分析存在顯著性差異(p＜0.05)。NCI-H661細胞單純照射組及RAD001 干預組D0、Dq、SF2分別為2.244，1.927，0.712 及1.596，1.369，0.548，SER 為1.406。NCI-H460細胞單純照射組及RAD0

4、01干預組D0、Dq、SF2分別為2.412，2.894，0.851 及2.359，1.848，0.706，SER 為1.022。
　　 免疫熒光共聚焦顯微鏡檢測顯示NCI-H661細胞RAD001 干預組24h 時間點γ-H2AX焦點殘留增多，NCI-H460細胞中未發(fā)現(xiàn)類似改變。RAD001 作用24h后兩株細胞p-p70S6K 蛋白表達量均較未加藥組降低。NCI-H661細胞RAD001 干預組較單純照射組24h 時間點γ