let-7a在尤文肉瘤發(fā)生發(fā)展中的功能及其機(jī)制研究.pdf

1、分類號(hào)：分類號(hào)：密級(jí)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：學(xué)號(hào)：416523211492南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文let7a在尤文肉瘤在尤文肉瘤發(fā)生發(fā)展發(fā)生發(fā)展中的功能中的功能及其及其機(jī)制研究機(jī)制研究Theeffectsoflet7aontheEwing’ssarcomamalignantprogressionitsmechanisms張中卒張中卒培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：曹凱副教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱

2、：外科學(xué)論文答辯日期：2014年5月30日答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人2014年5月摘要II摘要研究研究背景背景：尤文肉瘤(Ewing’ssarcomaES)是兒童和青少年第二大常見的惡性原發(fā)性骨腫瘤，以小圓形低分化細(xì)胞惡性增殖為特征。約80%患者于20歲左右發(fā)病。盡管治療手段不斷更新，但是該病的5年生存率卻一直不理想。尤其是對(duì)于伴發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移的患者，其生存率低于30%，而這一數(shù)據(jù)在過去的30年期間一直沒有變化。因此，較好的了解其發(fā)生發(fā)展的機(jī)制將

3、有助于我們尋找新型的診斷及治療方案。微小RNA(micrNAsmiRNAs)是一類約由22個(gè)核苷酸分子構(gòu)成的單股短鏈狀非編碼小分子RNA片段，通過與靶基因3’UTR區(qū)完全或者不完全配對(duì)，其在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控多種靶基因的表達(dá)，從而在多個(gè)生物進(jìn)程(如細(xì)胞增殖、分化、信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡及代謝)中均發(fā)揮重要的作用。let7家族是研究較多的miRNA之一，已報(bào)告其成員可同時(shí)作為癌基因或抑癌基因在若干腫瘤中起作用，但詳細(xì)機(jī)制尚不清楚。研究目的：研究

4、目的：本課題研究let7a在尤文肉瘤發(fā)生發(fā)展中的作用和機(jī)制，并實(shí)驗(yàn)其應(yīng)用于尤文肉瘤治療的可能性。方法：方法：我們首先利用stemloopRTPCR法檢測(cè)let7a在8對(duì)尤文肉瘤組織及其細(xì)胞中的表達(dá)；分別運(yùn)用CCK8法、細(xì)胞流式技術(shù)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)以及transwell實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)細(xì)胞增殖、周期、凋亡、遷移及侵襲的變化；通過進(jìn)一步的生物信息學(xué)靶基因的預(yù)測(cè)let7a的靶基因，并運(yùn)用雙螢光報(bào)告以及WesternBlotting實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證；最后，運(yùn)用

5、NODSCID免疫缺陷小鼠構(gòu)建尤文肉瘤荷瘤小鼠模型，進(jìn)一步分析let7a是否具有潛在的治療應(yīng)用價(jià)值，多點(diǎn)注射let7amimic觀察其對(duì)瘤塊生長(zhǎng)的影響。結(jié)果：結(jié)果：RTPCR結(jié)果顯示，顯示let7a在尤文肉瘤組織中呈明顯表達(dá)下調(diào)的趨勢(shì)，同時(shí)A673、SKES1以及RDES細(xì)胞中l(wèi)et7a的表達(dá)明顯低于人間充質(zhì)干細(xì)胞(humanmesenchymalstemcellsMSC)，提示let7a可能在尤文肉瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮抑癌基因的功能；細(xì)胞