流產(chǎn)嗜衣原體AlphaLISA檢測(cè)方法研究.pdf

1、流產(chǎn)嗜衣原體感染是能引起羊、牛、豬等多種動(dòng)物流產(chǎn)，產(chǎn)下死胎或弱胎的主要原因。作為人獸共患病病原，懷孕婦女與帶病動(dòng)物接觸后會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)現(xiàn)象的發(fā)生。危及公共衛(wèi)生安全及造成照成畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)的重大損失。流產(chǎn)嗜衣原體傳統(tǒng)檢測(cè)方法包括：分子生物學(xué)檢測(cè)法、直接涂片染色法、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)等。但是傳統(tǒng)方法這些方法存在各種缺陷：感染風(fēng)險(xiǎn)、靈敏度不夠高、操作步驟繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等。
　　AlphaLISA是基于近距離能量共振的原理發(fā)展起來(lái)的

2、一種新型的檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)抗原抗體的相互作用形成供體磁珠-抗原-抗體-受體磁珠復(fù)合物，在680nm的激光作用下發(fā)生熒光共振能力轉(zhuǎn)移（FRET），釋放單體氧分子作用于受體微珠，于615nm處出現(xiàn)發(fā)射光波。與傳統(tǒng)ELISA方法相比,AlphaLISA技術(shù)具有以下優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)便、全程無(wú)需洗板、精確度高、靈敏度高、樣本需求量小、高通量等。隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，AlphaLISA技術(shù)在病毒性疾病的快速檢測(cè)等方面，具有巨大應(yīng)用前景,有進(jìn)一步取代傳統(tǒng)EL

3、ISA方法的趨勢(shì)。
　　本研究通過(guò)對(duì)流產(chǎn)嗜衣原體流行病學(xué)的研究，利用基因工程方法，重組表達(dá)了流產(chǎn)嗜衣原體外膜主蛋白（MOMP）；利用提純的流產(chǎn)嗜衣原體細(xì)胞培養(yǎng)上清,免疫BALB/C小鼠，制備單克隆抗體；利用重組表達(dá)的流產(chǎn)嗜衣原體外膜主蛋白、樣品血清中的抗體及單克隆抗體之間的相互作用，建立了競(jìng)爭(zhēng)性AlphaLISA檢測(cè)方法。
　　研究結(jié)果：對(duì)流產(chǎn)嗜衣原體MOMP成功的進(jìn)行了原核表達(dá)，經(jīng)Western blot驗(yàn)證后，重組表達(dá)的

4、MOMP蛋白能與制備的針對(duì)MOMP蛋白的單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)；通過(guò)細(xì)胞融合，制備了抗流產(chǎn)嗜衣原體的單克隆抗體；根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)原理，建立了流產(chǎn)嗜衣原體AlphaLISA檢測(cè)方法。根據(jù)流行病學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，以商業(yè)化試劑盒檢測(cè)作為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算所建立的AlphaLISA檢測(cè)方法的靈敏度、特異性、正確指數(shù)、陽(yáng)性似然比，陰性似然比，綜合積分指數(shù)等，以此來(lái)評(píng)價(jià)所建立的流產(chǎn)嗜衣原體AlphaLISA檢測(cè)方法。結(jié)果表明：該方法靈敏度為0.375u