口服PF4基因治療的抗輻射損傷和抗腫瘤作用的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用轉(zhuǎn)化PF4基因及從16、17氨基酸位點(diǎn)的剪切體PF4<,17-70>基因的減毒沙門氏菌SL3261,通過口服途徑研究對(duì)小鼠全身致死性照射的保護(hù)作用.本題選用雄性6-8周Balb/c小鼠作為研究對(duì)象,進(jìn)行以下七方面工作:①照射后小鼠7、14天外周血象的檢測.②照射后小鼠7、14天骨髓集落培養(yǎng).③照射后小鼠雙側(cè)股骨的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MMNCs)計(jì)數(shù).④流式檢測照射后各組小鼠骨髓c-kit,scal-1雙標(biāo)細(xì)胞數(shù).⑤照射后各組小鼠生

2、存期的比較.⑥熒光顯微鏡檢測綠色熒光蛋白在小鼠體內(nèi)的表達(dá).⑦PCR方法檢測外源基因在小鼠組織器官的整合.結(jié)論:本研究首次證明以減毒的沙門氏菌株SL3261為載體通過口服途徑PF4和PF4<,17-70>基因可以保護(hù)小鼠免受致死量的全身照射損傷,促進(jìn)外周血及骨髓造血恢復(fù),延長照射后小鼠的生存期,通過綠色熒光顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)在小鼠的肝臟、脾臟、腎臟、小腸、骨髓及外周血均有綠色熒光蛋白的表達(dá),說明通過口服途徑細(xì)菌分布于全身各組織器官,PCR檢測

3、發(fā)現(xiàn)減毒沙門氏菌可以將外源基因整合到體細(xì)胞內(nèi)起到治療效果,而且沒有明顯的毒副作用.這種特征使它能夠適合于作為放療保護(hù)制劑應(yīng)用,尤其是對(duì)于放射治療導(dǎo)致骨髓衰竭的病人.本實(shí)驗(yàn)通過口服攜帶人的PF4<,17-70>基因片段的SL3261減毒菌株,研究抗腫瘤血管新生在惡性黑色素瘤治療中的作用.本題選用雌性6-8周C57BL/6小鼠作為研究對(duì)象,進(jìn)行了以下的研究工作:①各組小鼠腫瘤體積的比較②照射后各組小鼠生存期的比較③熒光顯微鏡檢測綠色熒光蛋白

4、在小鼠體內(nèi)的表達(dá)④PCR檢測外源基因在小鼠組織器官的整合⑤免疫組化檢測腫瘤內(nèi)微血管密度的區(qū)別⑥腫瘤原位凋亡檢測⑦PF4<,17-70>質(zhì)粒轉(zhuǎn)染B16惡性黑色素瘤細(xì)胞系流式分析細(xì)胞的凋亡率.討論通過口服途徑,減毒沙門氏菌可以作為基因治療的載體,介導(dǎo)外源PF4<,17-70>基因在小鼠組織細(xì)胞中的有效整合及表達(dá).減毒菌株在腫瘤組織內(nèi)聚集,將PF4<,17-70>釋放到腫瘤組織內(nèi),抑制腫瘤的血管新生,從而抑制腫瘤的生長,延長荷瘤小鼠的生存期.