白血病-腫瘤血管新生及抗血管新生基因治療研究.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文白血病腫瘤血管新生及抗血管新生基因治療研究姓名：傅建新申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師：阮長耿20030401白血病朋十瘤血管新生及抗血管新生基因治療研究摘要具有抑制血管新生的能力，可用于體內(nèi)血管抑制療法研究。2綠色熒光蛋白去整合素融合蛋白的基因構(gòu)建與表達目的：表達綠色熒光蛋白去整合素融合基因，并分析重組蛋白的生物學(xué)活性。方法：利用HFPCR擴增II型蛇毒出血性金屬蛋白酶agacutin基因的去整合素區(qū)，并

2、與綠色熒光蛋白基因進行拼接：將綠色熒光蛋白去整合素融合基因克隆入表達載體pQE一30，IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析重組蛋白的細(xì)胞結(jié)合能力。結(jié)果：agacutin去整合素區(qū)基因長282bp，綠色熒光蛋白一去整合素融合基因長lOlibp，可編碼343個氨基酸：SDS—PAGE分析顯示重組蛋白占菌體總蛋白的38％，分子量約為39kDa，并經(jīng)免疫印跡證實；FCM法顯示重組綠色熒光蛋白去整合素融合蛋白可與乳腺癌細(xì)胞MDAMB

3、231和內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926特異結(jié)合。結(jié)論：綠色熒光蛋白去整合素融合蛋白的研制將有助于研究去整合素的功能。關(guān)鍵詞：阻滯原；去整合素；綠色熒光蛋白；重組蛋白；血管新生抑制物三、自血病，腫瘤的抗血管新生，浸潤基因治療研究1內(nèi)皮抑素基因治療研究目的：探究內(nèi)皮抑素在白血病和乳腺癌抗血管新生基因治療中的價值。方法：構(gòu)建分泌型內(nèi)皮抑素的表達載體并建立逆病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)；用內(nèi)皮抑素病毒分別感染白血病細(xì)胞WEHI3B，K562及乳腺癌細(xì)

4、胞MDAMB一231；通過內(nèi)皮細(xì)胞生長抑制活性和乳腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)生長抑制反映內(nèi)皮抑素功能。結(jié)果：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與交互感染策略分別獲得單嗜型和雙嗜型內(nèi)皮抑素病毒生產(chǎn)細(xì)胞，其中后者上清中病毒的滴度約為78x105CFU／ml；內(nèi)皮抑素病毒感染、G418選擇得到內(nèi)皮抑素基因修飾的3種白血病朋十瘤細(xì)胞，PCR分析顯示三者均有內(nèi)皮抑索基因整合并持續(xù)表達，其分泌的內(nèi)皮抑素能明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926的增殖(132％253％，均為P005)；在裸

5、鼠皮下接種28天后，MDA一231／ES細(xì)胞組的腫瘤體積和重量分別為1784662mm3和1920548mg，而MDA231／NeoR細(xì)胞對照組分別為90822327mm3和8037_1464mgr均為P0001)：MDA231／ES組腫瘤微血管密度和VEGF表達較對照組明顯下調(diào)。結(jié)論：逆病毒載體可介導(dǎo)內(nèi)皮抑素基因在白血病細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞中有效表達，并通過旁分泌方式抑制血管新生，具有明顯的抗腫瘤生長的作用。2可溶型尿激酶受體和尿激酶氨基