肢體缺血后處理通過JAK2-STAT3對大鼠缺血再灌注損傷的作用機制.pdf

1、目的:觀察肢體缺血后處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用，研究內源性蛋白酪氨酸激酶2(Janus kinase2，JAK2)/信號轉導子和轉錄激活子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)信號轉導通路在肢體缺血后處理對腦保護作用中的機制進行探討。
　　方法:用改良線栓法制備局灶性大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型(Middle cerebral arte

2、ry occlusion and reperfusion，MCAO/R)。60只健康雄性SD大鼠（240-260g）隨機平均分為4組，假手術組（sham）、缺血再灌注組（I/R組）、肢體缺血后處理(Lpost組)、肢體缺血后處理+AG490(JAK2/STAT3通路阻斷劑)組（Lpost+AG490組）。I/R組:缺血2小時，再灌注24小時。Lpost組:缺血2小時，再灌注24小時，再灌注前實施肢體缺血后處理（缺血15min，灌注15m

3、in）3個循環(huán)。Lpost+AG490組:再灌注前5min時腹腔注射AG490lmg/kg，其他處理與Lpost組相同。分別采用神經功能評分法觀察大鼠行為學評分變化，HE染色病理形態(tài)學觀察大鼠腦組織損傷情況的變化，TTC染色測腦梗死體積，TUNEL法測定腦細胞凋亡，western blot法檢測大鼠缺血半暗帶區(qū)P-STAT3表達，免疫組織化學法測Caspase-3免疫陽性細胞數。分析肢體缺血后處理與腦缺血再灌注損傷及P-STAT3、Ca

4、spase-3免疫陽性細胞數之間的關系。
　　結果:1.肢體缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷后神經行為學變化的影響:假手術組大鼠無明顯神經功能缺損，腦缺血再灌注模型組、肢體缺血后處理組及肢體缺血后處理+AG490組均有不同程度的神經功能缺損，神經行為學評分差異有顯著意義(P＜0.01)，提示肢體缺血后處理能改善神經功能缺損癥狀。2.肢體缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷后缺血側頂葉皮層（尾狀核平面）病理改變的影響:假手術組大鼠腦組織

5、結構正常，內皮細胞及神經細胞結構完整，胞漿及胞核清晰。缺血再灌注組可見大腦皮層細胞體積縮小，胞漿疏松，胞質濃縮，核固縮，染色質濃集于核膜附近，形成凋亡小體。肢體缺血后處理+AG490組神經細胞變性壞死程度較缺血再灌注組輕，而肢體缺血后處理組較前兩者則壞死程度更輕，其差異有顯著意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少腦神經病理組織損傷。3.肢體缺血后處理對大鼠腦梗死病灶體積的影響:缺血主要累及皮層和基底節(jié)，TTC染色未缺血部分呈紅

6、色，缺血部分呈淡白色。假手術組大鼠腦組織無梗死病灶。缺血再灌注組腦梗死面積最大，肢體缺血后處理+AG490組腦梗死面積較前者減少，兩者相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，肢體缺血后處理組梗死面積最小，肢體缺血后處理組與缺血再灌注組及肢體缺血后處理+AG490組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少腦梗死病灶體積。4.肢體缺血后處理對Caspase-3免疫陽性細胞數的影響:Caspase-3主要表達于神經元，免

7、疫陽性細胞呈棕黃色，鏡下見胞質、胞核棕黃色著色或顆粒沉著為陽性細胞，未見棕黃色染色為陰性結果。假手術組僅有少量Caspase-3陽性細胞表達，可能為正常凋亡細胞。I/R組Caspase-3免疫陽性細胞數最多，與假手術組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與I/R組比較，Lpost組、Lpost+AG490組Caspase-3免疫陽性細胞數明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。且Lpost組較Lpost+AG490組Caspas

8、e-3免疫陽性細胞數減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少Caspase-3免疫陽性細胞數。5.肢體缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷后缺血側頂葉腦組織中P-STAT3表達的影響:假手術組未見明顯P-STAT3蛋白的表達，缺血再灌注組組腦組織P-STAT3蛋白的表達明顯增多，肢體缺血后處理組P-STAT3蛋白的表達減少，肢體缺血后處理+AG490組P-STAT3蛋白的表達明顯減少。肢體缺血后處理組與缺血再灌注組

9、及肢體缺血后處理+AG490組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少P-STAT3蛋白的表達。
　　結論:1.腦缺血再灌注后出現大鼠神經功能缺損、腦組織病理損傷明顯，腦梗死體積增加，腦細胞凋亡數目增多。2.大鼠腦缺血再灌注增加P-STAT3表達、Caspase-3陽性細胞表達。Caspase-3參與缺血區(qū)細胞凋亡的形成，而STAT3激活及超量表達可能調節(jié)缺血后Caspase-3表達。3.肢體缺血后處理能改