丙型肝炎病毒高變區(qū)1介導(dǎo)HCV感染細(xì)胞機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）是導(dǎo)致肝硬化、肝細(xì)胞癌等終末期肝病的主要治病因子，目前尚無(wú)針對(duì)丙型肝炎的疫苗及特效的治療藥物，明確HCV入胞機(jī)制對(duì)治療丙型肝炎提供了新思路。第一高變區(qū)（HVR1）位于 HCV包膜E2蛋白N端，是介導(dǎo)HCV包膜E2蛋白與細(xì)胞受體SR-BI結(jié)合的關(guān)鍵區(qū)域。通過(guò)建立HVR1蛋白與Raji細(xì)胞和L-02細(xì)胞結(jié)合模型，探究影響HVR1蛋白與細(xì)胞結(jié)合的關(guān)鍵分子，并進(jìn)一步探索 HVR1

2、蛋白與細(xì)胞結(jié)合對(duì)下游信號(hào)通路的影響。
　　方法：原核表達(dá)純化 HVR1蛋白，HVR1蛋白與 Raji細(xì)胞、L-02細(xì)胞共同孵育后，再與標(biāo)記 FITC的HVR1抗體共同孵育后進(jìn)行流式檢測(cè)。利用小干擾 RNA方法沉默 SR-BI基因，并通過(guò) qPCR和western-blot檢測(cè)沉默效果，SR-BI沉默后流式檢測(cè) HVR1蛋白與細(xì)胞結(jié)合效率。western-blot檢測(cè) HVR1蛋白與細(xì)胞結(jié)合后ERK、 JNK信號(hào)通路，LDL存在HV

3、R1蛋白與L-02細(xì)胞結(jié)合后JNK信號(hào)通路變化。
　　結(jié)果： HVR1蛋白濃度在200μg/ml時(shí)與Raji細(xì)胞和L-02細(xì)胞孵育30min，結(jié)合率分別達(dá)到52.4％和58.9%。LDL存在情況下HVR1蛋白與 Raji細(xì)胞結(jié)合率未有明顯變化，但是HVR1蛋白與 L-02細(xì)胞結(jié)合率上升至85%。SR-BI基因沉默后HVR1蛋白與Raji細(xì)胞和L-02細(xì)胞結(jié)合率分別下降了63%和66%。western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HVR1蛋白可

4、以激活L-02細(xì)胞的ERK和JNK信號(hào)通路，但在Raji細(xì)胞中未發(fā)生ERK和JNK信號(hào)通路的活化，并且LDL存在情況下可以明顯抑制L-02細(xì)胞中JNK信號(hào)通路。
　　結(jié)論： SR-BI受體在介導(dǎo)HVR1蛋白與Raji細(xì)胞和L-02細(xì)胞結(jié)合的過(guò)程中具有重要作用，LDL可以增強(qiáng) HVR1蛋白與 L-02細(xì)胞的結(jié)合效率，HVR1與 L-02細(xì)胞結(jié)合后可激活細(xì)胞中 ERK和JNK信號(hào)通路，但 LDL存在時(shí) JNK信號(hào)通路被抑制，因此推斷在