果蠅卵巢濾泡細胞譜系發(fā)育中的功能性microRNA篩查.pdf

1、果蠅作為一種模式生物被廣泛應用于生物學研究中，其中果蠅卵巢是研究發(fā)育的良好模型。果蠅的卵子發(fā)生涉及到干細胞的維持，細胞分化，細胞遷移，體軸的建立等重要的生物學過程。利用卵巢組織探究卵子發(fā)生過程及其調控機制一直是生物學熱點研究領域之一。果蠅的卵子發(fā)生過程可以分為三個階段即前期、中期和后期。卵子發(fā)生中的濾泡細胞譜系發(fā)育起始于干細胞的分化，位于卵原區(qū)的成體干細胞分化為兩類前體細胞即前體莖/極細胞和前體濾泡細胞，其中前體莖細胞/極細胞進一步分化

2、為成熟的莖細胞和極細胞，莖細胞在相鄰卵室的連接與分隔中起著重要的作用。而前體濾泡細胞則分化為包裹生殖細胞的上皮濾泡細胞。當卵子發(fā)生到中期的時候，上皮濾泡細胞經歷一個DNA內復制階段，此時細胞不發(fā)生分裂，而細胞核加倍。在卵子發(fā)生9期的時候，有一群4-8個濾泡細胞由于受到Unpaired配體的作用，從卵室前端分化脫離出來形成一個花環(huán)型的邊界細胞簇，向卵母細胞前端遷移，于第10期時到達滋養(yǎng)細胞與卵母細胞的分界處，并最終形成精子進入的通道。卵子

3、發(fā)生到10b期后濾泡細胞則進入絨毛膜基因擴增階段，進而完成卵殼結構的發(fā)育。在卵子發(fā)生過程中濾泡細胞的分化與發(fā)育主要受到JAK-STAT,Notch和EGFR信號通路的調控。microRNA（miRNA）是長度約為22個核苷酸的非編碼RNA，通過轉錄后調控抑制其靶基因的表達。miRNA已被證明廣泛參與發(fā)育、生理及病理過程。有關miRNA參與調控果蠅卵巢濾泡細胞譜系發(fā)育的研究正處于起步階段。
　　本論文利用可獲得的果蠅miRNA遺傳資

4、源，應用UAS/GAL4二元表達系統(tǒng)時空特異性地過表達或敲減（knock down）miRNA基因，對總計30個miRNAs在濾泡細胞譜系發(fā)育中的功能進行了系統(tǒng)篩查，獲得了有價值的實驗結果。按卵子發(fā)生時相，本研究所獲實驗結果可歸納如下：（1）利用e22c-Gal4在卵子發(fā)生前期過表達mir-1或mir-124均能導致卵室融合的表型，進一步實驗發(fā)現(xiàn)，融合卵室間無莖細胞分子標記 Bib的表達，提示莖細胞分化的缺陷；（2）利用GR1-Gal4

5、或C306-Gal4驅動miRNA在卵子發(fā)生中期過表達發(fā)現(xiàn)，mir-7，mir-263b或mir-276b的過表達均能誘發(fā)邊界細胞遷移延遲的發(fā)生，其中，邊界細胞遷移延遲表型同樣出現(xiàn)在mir-7表達下調（Slbo-Gal4驅動UAS-mir-7 sponge表達）的遺傳背景中；（3）利用在卵子發(fā)生后期濾泡細胞中表達的55B-Gal4或CY2-Gal4驅動子篩查發(fā)現(xiàn)，過表達 mir-7或mir-263b可導致卵殼圖式建成的缺陷。本研究通過遺