賁門腺癌microRNA表達(dá)譜的篩查與驗(yàn)證.pdf

1、目的：篩查并驗(yàn)證出賁門腺癌表達(dá)的microRNA表達(dá)譜，為賁門腺癌的發(fā)病機(jī)制研究、早期預(yù)警、新的治療方法及靶向藥物研發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：從2011年12月開始建立腫瘤科的賁門癌腫瘤組織和癌旁正常組織的組織標(biāo)本庫備用。所有試驗(yàn)標(biāo)本均由實(shí)驗(yàn)員攜帶便攜式液氮罐至手術(shù)室收集，賁門腺癌腫瘤經(jīng)外科醫(yī)師切除后，于30分鐘內(nèi)自手術(shù)標(biāo)本上切除足夠的癌組織、癌旁組織和正常組織，隨即編號(hào)放入便攜式液氮罐冷凍，后快速轉(zhuǎn)入腫瘤科-80℃超低溫冰箱中

2、組織標(biāo)本庫長期保存?zhèn)溆?。根?jù)之前簽訂的協(xié)議，在賁門癌腫瘤組織標(biāo)本庫中隨機(jī)選取20例病人的賁門腺癌腫瘤組織及其對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織，送至上?？党缮锕こ逃邢薰?，使用Exiqon公司16.0版本的LNATM microRNA芯片（涵蓋1000個(gè)已知的microRNAs）對(duì)賁門腺癌腫瘤組織及癌旁正常組織進(jìn)行了檢測，初步篩查出在賁門癌腫瘤組織和癌旁組織中呈差異性表達(dá)的microRNA。根據(jù)microRNA芯片的掃描結(jié)果，擴(kuò)大樣本量，設(shè)計(jì)引物，應(yīng)

3、用ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量 PCR儀對(duì)篩查出的呈顯著差異表達(dá)的 microRNA在30對(duì)賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中的差異表達(dá)情況的進(jìn)行擴(kuò)增、分析、驗(yàn)證。microRNA芯片的篩查結(jié)果由上?？党缮锕こ逃邢薰矩?fù)責(zé)分析和處理。qRT-PCR的驗(yàn)證結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的格式表示，使用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行配對(duì) t檢驗(yàn)分析和 Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)分析；檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定在α=0.05水平。
　　結(jié)果：microRNA

4、芯片的篩查結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)在賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中共存在209種 microRNA的差異表達(dá)，其中的microRNA-645等50個(gè)microRNA在癌和癌旁組織中呈顯著差異表達(dá)。擴(kuò)大樣本量，設(shè)計(jì)引物對(duì)這50種在賁門腺癌癌和癌旁組織中呈顯著差異表達(dá)的 microRNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn) microRNA-20b、microRNA-195、microRNA-337、microRNA-338、microRNA-433、mi

5、croRNA-10a和microRNA-645等16種microRNA在賁門腺癌的腫瘤組織和癌旁組織中的表達(dá)差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），可以驗(yàn)證出與microRNA芯片篩查預(yù)測結(jié)果一致的在癌組織中的上調(diào)或下調(diào)趨勢；而其余34種microRNA在兩者之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），無法驗(yàn)證出與microRNA芯片篩查預(yù)測結(jié)果一致的在癌組織中的上調(diào)或下調(diào)趨勢。
　　結(jié)論：賁門癌的microRNA表達(dá)譜包括 micr