PKD2調(diào)控GOLPH3對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討PKD2與GOLPH3促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的具體機(jī)制，為膠質(zhì)瘤的分子靶向治療提供潛在的靶點(diǎn)。
　　方法：1.運(yùn)用Western blot(WB)檢測(cè)非腫瘤腦組織及不同級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中Protein kinase D2(PKD2)與GOLPH3的蛋白水平，分析PKD2與GOLPH3在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生的相關(guān)性。2.運(yùn)用亞克隆技術(shù)構(gòu)建PKD2-pEGFP-N1質(zhì)粒3.在體外培養(yǎng)的U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中通過PolyJetTM和Lipof

2、ectamineTM-2000分別轉(zhuǎn)染PKD2過表達(dá)質(zhì)粒和siRNA，運(yùn)用WB檢測(cè)過表達(dá)和干擾效果;CCK-8法和EdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。4.在U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中通過LipofectamineTM-2000分別轉(zhuǎn)染GOLPH3過表達(dá)質(zhì)粒和siRNA，運(yùn)用WB檢測(cè)過表達(dá)和干擾效果，CCK-8法和EdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。5.在U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中干擾和過表達(dá)PKD2后用WB檢測(cè)GOLPH3、p-AKT、AKT的蛋白水平。6.在U251

3、膠質(zhì)瘤細(xì)胞中干擾GOLPH3后用WB檢測(cè)PKD2、p-AKT、AKT蛋白水平。7.在U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)PKD2同時(shí)下調(diào)GOLPH3，應(yīng)用WB檢測(cè)共轉(zhuǎn)體系，EdU法和CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
　　結(jié)果：1.在人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中，PKD2和GOLPH3表達(dá)水平明顯高于非腫瘤腦組織，并且隨膠質(zhì)瘤級(jí)別的增高其蛋白表達(dá)水平也增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01 P＜0.05)，并且PKD2和GOLPH3在膠質(zhì)瘤中表達(dá)呈正相關(guān)

4、性(P＜0.05)2.在U251細(xì)胞中下調(diào)PKD2或GOLPH3后細(xì)胞增殖能力明顯下降，過表達(dá)PKD2或GOLPH3產(chǎn)生相反的結(jié)果。3.下調(diào)或過表達(dá)PKD2，GOLPH3，p-AKT的蛋白水平分別減少和增加。4.下調(diào)GOLPH3，PKD2蛋白水平不變，p-AKT的蛋白水平減少。5.過表達(dá)PKD2同時(shí)下調(diào)GOLHP3后，U251細(xì)胞增殖能力與對(duì)照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1.PKD2和GOLPH3在腦膠質(zhì)瘤組