玻璃化法與化學(xué)萃取制備同種異體肌腱生物學(xué)性能的比較.pdf

1、目的:肌腱缺損在臨床中是最為多見的手外傷疾病，在其治療過程中常常需要利用異體肌腱移植來修復(fù)其不同程度的缺損，以重建失去的重要功能，最大程度地改善癥狀和恢復(fù)功能。目前對于不同程度的肌腱缺損來說可用于移植修復(fù)的材料多種多樣，根據(jù)不同的制備方法可分為自體肌腱、異體肌腱及組織工程化肌腱等，其修復(fù)方法中常用的有自體肌腱（轉(zhuǎn)位、延長及自體筋膜）和異體肌腱移植等。傳統(tǒng)方法因取材來源有限，增加新的創(chuàng)傷及影響取材位的主要功能等缺點，不能同時滿足較嚴(yán)重的肌

2、腱缺損，使人們不斷探索肌腱制備的新途徑，為肌腱缺損的治療康復(fù)提供新思路。自上世紀(jì)50年代以來，對異體肌腱的深入研究發(fā)展迅速，已取得了豐碩的成果，異體肌腱移植已經(jīng)成為目前治療肌腱缺損的主要方法，但是同時具有生物活性好、力學(xué)性能強(qiáng)，免疫原性低等優(yōu)點的異體肌腱是其需要解決的重點難點，移植后肌腱粘連重、力學(xué)性能弱和免疫排斥反應(yīng)強(qiáng)烈等問題都可致其失敗。有關(guān)學(xué)者們已研究表明肌腱的抗原性主要存在于其肌腱細(xì)胞的胞膜上而肌腱的膠原纖維本身抗原性較低，如何

3、去除免疫排斥反應(yīng)、防止肌腱粘連和保留移植物的相關(guān)生物學(xué)性能等問題是今后研究的重點。本實驗以來亨雞為實驗取材對象，利用玻璃化法與化學(xué)萃取法制備同種異體肌腱，通過形態(tài)組織學(xué)觀察、生物力學(xué)測試和免疫原性（外周血中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計數(shù)和CD4+/CD8+的比值）檢測等三方面指標(biāo)進(jìn)行分析、探討玻璃化法與化學(xué)萃取制備同種異體肌腱間的相關(guān)生物學(xué)性能，以期制備出較為理想的同種異體肌腱，為同種異體肌腱的制備及移植進(jìn)一步提供有利的理論支持及臨床

4、指導(dǎo)。
　　 方法:本實驗選取同批孵出、同條件飼養(yǎng)6個月齡體重(2.0～2.2)Kg，平均(2.10±0.053)Kg的健康雄性白色來亨雞48只（由河北醫(yī)大動物實驗中心提供），經(jīng)編號及標(biāo)記處理隨機(jī)分為三組即A（玻璃化法組）、B（化學(xué)萃取組）和C（空白對照組）三組，每組共16只。實驗采用來亨雞雙足第三足趾為手術(shù)實驗趾，于動物大腿肌肉中上部位注射1.0％的氯胺酮（15.0mg/kg）及地西泮（1.0mg/kg），待動物麻醉后將來亨雞

5、雙下肢外展俯臥位固定，進(jìn)行消毒鋪單用橡皮條止血后行手術(shù)。手術(shù)過程即在掌側(cè)取Bruner's切口，切開皮膚后充分鈍性游離出屈趾淺深肌腱及腱紐，將兩腱紐于肌腱連接處橫斷取下從第一趾間關(guān)節(jié)近端到趾尖處長約5.0cm的趾深屈肌腱，將離斷肌腱經(jīng)反復(fù)沖洗去除其外膜后置于D-Hank's液(4℃)冰箱中冷藏備用。對經(jīng)過三種不同方法（玻璃化法、化學(xué)萃取和空白對照）制備的肌腱標(biāo)本行Ⅰ形態(tài)組織學(xué)觀察:分別在大體觀察和光鏡觀察（HE、Masson染色）等方面

6、進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察分析;Ⅱ生物力學(xué)測試:用生物力學(xué)試驗機(jī)(CSS-44020)對三組肌腱分別行拉伸斷裂強(qiáng)度(Pmax)、拉伸斷裂功耗(Wmax)和拉伸斷裂延伸率(δmax)測定;Ⅲ免疫原性檢測:經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測外周血中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞所占比例并計算CD4+/CD8+比值（將處理過的A、B、C三組肌腱兩兩組合分別移植回同種異體動物體中，于1、2、3、6周末抽取外周血進(jìn)行檢測）。
　　 結(jié)果:(1)形態(tài)組織學(xué)觀察:①大體上，

7、空白對照組的肌腱是長索狀乳白色肌腱組織，質(zhì)地柔軟表面較光滑，彈性韌性較良好，所有檢測肌腱均完整無缺損，三組之間未見明顯差別。②光鏡觀察，空白對照組肌腱腱細(xì)胞沿膠原纖維四周呈串珠狀縱向分布排列，數(shù)根膠原纖維緊密地相連呈束狀排列。玻璃化法組肌腱可見少許膠原纖維有斷裂跡象，膠原纖維之間間隙較空白對照組略增寬，腱細(xì)胞數(shù)與空白對照組相比略少?；瘜W(xué)萃取組肌腱膠原纖維間間隙較玻璃化組稍寬，膠原纖維存在少許斷裂，未見細(xì)胞殘留跡象;
　　 (2)

8、生物力學(xué)檢測:三組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明三組之間未見明顯差異（P＞0.05），說明兩種方法均較好地保存了肌腱的生物力學(xué)性能;(3)免疫原性檢測，三組之間1、2周末CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞含量及CD4+/CD8+的比值差異有統(tǒng)計學(xué)意義，三組之間差異有顯著性(P＜0.05);3、6周末A、B組間CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞含量及CD4+/CD8+的比值差異無統(tǒng)計學(xué)意義，A、B組的含量及比值均低于C組，表明AB兩種方法間未見明顯差異(