雄激素受體剪接變異體核轉(zhuǎn)位功能障礙的機(jī)制研究.pdf

1、1、 HSP90在AR基因pre-mRNA剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用
　　研究目的:明確HSP90在雄激素受體剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用，闡述其與PCOS患者高雄狀態(tài)之間的關(guān)系。
　　研究方法:建立過表達(dá)細(xì)胞模型，使用免疫熒光技術(shù)，分析由不同AR剪接變體編碼的蛋白質(zhì)核轉(zhuǎn)位能力的差異。并通過Co-IP和Western Blot技術(shù)分析AR剪接變異體與HSP90的結(jié)合親和力的改變。同時(shí)利用免疫熒光技術(shù)檢測AR剪接變異體與HS

2、P90的亞細(xì)胞共定位變化。
　　研究結(jié)果:免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)模型在雄激素暴露2小時(shí)后野生型AR絕大部分入核，而兩種剪接變異體（缺失型AR和插入型AR）大部分仍集中在胞漿中，入核明顯減少，出現(xiàn)核轉(zhuǎn)位障礙;免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)未受到雄激素刺激時(shí)兩種雄激素受體剪接變異體與野生型雄激素受體相比結(jié)合了更多的HSP90，在雄激素刺激后，兩種剪接變異體與HSP90的結(jié)合出現(xiàn)了明顯的下降。共定位實(shí)驗(yàn)顯示雄激素暴露后兩種剪接變異體與HSP90的共

3、定位主要出現(xiàn)在胞漿中，并且共定位明顯減少。
　　結(jié)論:雄激素受體剪接變異體與HSP90的結(jié)合出現(xiàn)異常，可能是其核轉(zhuǎn)位障礙的重要原因。
　　2、 Importinα在AR基因pre-mRNA剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用
　　研究目的:明確importinα在雄激素受體剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用，闡述其與PCOS患者高雄狀態(tài)之間的關(guān)系。
　　研究方法:建立過表達(dá)細(xì)胞模型，使用免疫熒光技術(shù)，分析由不同AR剪接變體編碼

4、的蛋白質(zhì)核轉(zhuǎn)位能力的差異。并通過Co-IP技術(shù)分析造成這種核轉(zhuǎn)位差異的可能機(jī)制。將沉淀下來的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行Western Blot以檢測與核轉(zhuǎn)位過程關(guān)系密切的蛋白質(zhì)importinα以分析雄激素受體的野生型和剪接變體與其結(jié)合解離能力的差異，從而闡明AR剪接變體與高雄的關(guān)系。
　　研究結(jié)果:免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)模型在雄激素暴露2小時(shí)后野生型AR絕大部分入核，而兩種剪接變異體（缺失型雄激素受體和插入型雄激素受體）大部分仍集中在胞漿