骨髓干細胞在SD大鼠急性肝衰竭模型內(nèi)定向分化為肝樣細胞的機制研究.pdf

1、我國是肝炎、肝硬化及肝癌的高發(fā)國家,臨床上由此引發(fā)的終末期肝功能衰竭十分常見,目前最有效的治療手段是原位肝移植(OLT)。然而,由于供體的缺乏、免疫排斥和高額費用等問題,原位肝移植的廣泛應用受到了限制。由于肝細胞來源局限以及生物安命性等因素困擾,生物人工肝(BAL)的臨床應用遠未達到理論上的預期效果。作為治療肝功能衰竭的有效方法,自體骨髓干細胞移植治療越來越受到了人們的重視,但由于骨髓干細胞向肝樣細胞定向分化的機制問題尚未闡明,使得骨髓

2、干細胞自體移植的臨床應用遠未達到人們的預期效果。對骨髓干細胞分化的微環(huán)境中蛋白分_了的研究有助于初步闡明骨髓干細胞體內(nèi)定向分化為肝樣細胞的分子機制,然而,目前對骨髓干細胞向肝樣細胞定向分化的體內(nèi)微環(huán)境還缺乏深入的研究。
　　 第一章：SD大鼠急性藥物性肝衰竭模型的建立
　　 目的：建立SD大鼠急性藥物性肝衰竭模型。
　　 方法：選用SD大鼠24只,按隨機數(shù)字表法平均分為兩組:實驗組和對照組,各12只。實驗組SD大

3、鼠腹腔內(nèi)注射濃度為10g/L的D-氨基半乳糖注射液,劑量為0.12L/kg體重:對照組SD大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水,注射劑量為0.12L/kg體重。觀察兩組SD大鼠的一般情況,48小時后在全麻下分別取出兩組SD大鼠的同一葉肝臟,用作病理活檢及為下一步實驗留取實驗標本；另心臟采血留取血清以備血清生化檢查(AST、ALT)。
　　 結果：1、成功建立SD大鼠急性藥物性肝衰竭模型。2、實驗組SD大鼠給藥后活動及對外界的反應未立即出現(xiàn)明顯

4、的變化；給藥24小時后出現(xiàn)反應遲鈍、行動遲緩、飲食減少、尿色發(fā)黃:48小時后出現(xiàn)明顯的肝衰竭表現(xiàn)。對照組SD大鼠48小時內(nèi)未出現(xiàn)上述癥狀。3.給藥48小時后實驗組SD大鼠谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)水平顯著高于對照組SD大鼠的水平,有顯著件差異(P<0.001)。
　　 結論：SD大鼠是建立急性藥物性肝衰竭模型的理想動物之一,也為我們進一步開展下面的研究奠定了堅實的基礎。
　　 第二章：建立實驗組和對照組S

5、D大鼠肝臟蛋白質的雙相電泳圖譜
　　 目的：建立實驗組和對照組SD大鼠肝臟蛋白質的雙相電泳圖譜,探討它們之間的差異。
　　 方法：①給藥48小時后,分別取出實驗組及對照組每只SD大鼠同一葉肝臟組織,大小約為1cm3。②采用氯化銫梯度離心法去除實驗組和對照組SD大鼠肝臟組織蛋白質,通過固相pH梯度(IPG)等電聚焦和梯度聚丙烯酰胺雙相電泳分離蛋白質,分析電泳圖像。
　　 結果：實驗組和對照組SD大鼠肝臟組織電泳結果

6、存在顯著差異,這些蛋白質在pH 3～10、相對分子質量16000～250000范圍內(nèi)能被很好地分離；比較實驗組和對照組SD大鼠肝臟蛋白質的雙相電泳圖譜,可見27個上調(diào)或下調(diào)的蛋白質差異點位。
　　 結論：成功獲得實驗組和對照組SD大鼠肝臟蛋白質的雙相電泳圖譜,并獲得27個蛋白質差異點位。
　　 第三章：實驗組和對照組SD大鼠肝臟組織差異蛋白質位點的質譜分析
　　 目的：鑒定實驗組和對照組SD大鼠肝臟組織之間的差異

7、表達蛋白位點,明確這些蛋白質的性質。
　　 方法：從實驗組和對照組SD大鼠肝臟組織雙相電泳圖譜的結果中選取差異顯著的27個蛋白質位點,使用基質輔助激光解吸附飛行時間質譜儀和肽質量指紋譜數(shù)據(jù)庫對這些差異蛋白質點進行分析鑒定。
　　 結果：對27個差異顯著的蛋白質點進行質譜鑒定,根據(jù)檢測結果與肽質量指紋譜數(shù)據(jù)庫中現(xiàn)有蛋白質的匹配程度確定所檢測點位的蛋白質屬性,再根據(jù)GPMAW 8.00 DEMO蛋白質質譜與序列分析軟件分析檢