2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的傳染病之一。根據(jù)核酸序列的差異,PRRSV被劃分為歐洲型和美洲型毒株。2006年5月以來,我國暴發(fā)的被稱為“高熱綜合癥”的豬病,即為變異的美洲型高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV)所致。
  豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)是PRRSV入侵豬體

2、的靶細(xì)胞,已發(fā)現(xiàn)在PAM上存在三種主要的PRRSV細(xì)胞受體:硫酸乙酰肝素(HS)、唾液酸粘附素(Sn)和清道夫受體CD163。HS的作用是吸附PRRSV到細(xì)胞表面,Sn可以加強(qiáng)吸附作用并介導(dǎo)PRRSV內(nèi)吞進(jìn)入胞內(nèi),CD163則是隨PRRSV一同進(jìn)入胞內(nèi)介導(dǎo)病毒的脫衣殼和病毒基因組的釋放。近年研究發(fā)現(xiàn),將豬源CD163分子轉(zhuǎn)染至PRRSV非允許細(xì)胞,使得細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)CD163蛋白后就成為PRRSV允許細(xì)胞,能夠成功感染增殖PRRSV,而其

3、他兩種受體則不能,說明CD163在病毒感染細(xì)胞過程中至關(guān)重要。
  作為清道夫受體超家族的成員,CD163參與機(jī)體對異物的免疫應(yīng)答并參與炎癥反應(yīng),其在細(xì)胞表面的表達(dá)受多種因素的影響,其中去整合素金屬蛋白酶ADAM17已被證實(shí)能夠介導(dǎo)人源CD163的剪切調(diào)控,從而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。但是ADAM17能否介導(dǎo)豬源CD163的剪切調(diào)控從而影響病毒的入侵還不得而知,因此本研究闡釋了ADAM17介導(dǎo)CD163的表達(dá)調(diào)控機(jī)制及其對PRRSV感染的影

4、響。
  首先,從PAM細(xì)胞中擴(kuò)增了豬源CD163基因,克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-CD163,在測序正確后將其轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,通過流式細(xì)胞術(shù)和G418加壓篩選,獲得穩(wěn)定表達(dá)CD163的HEK293/CD163細(xì)胞系;病毒感染實(shí)驗(yàn)表明PRRSV能夠感染HEK293/CD163細(xì)胞系,為研究病毒的體外感染奠定了基礎(chǔ)。
  其次,通過抑制劑、激活劑、siRNA基因干擾和基因過表達(dá)等方法來抑制或者增強(qiáng)PAM和HEK2

5、93/CD163細(xì)胞的ADAM17表達(dá)水平或活性,檢測ADAM17對豬源CD163的剪切能力。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)ADAM17表達(dá)下調(diào)或者活性受到抑制時(shí),細(xì)胞表面CD163的表達(dá)水平升高;當(dāng)ADAM17表達(dá)上調(diào)或者被激活時(shí),細(xì)胞表面CD163的表達(dá)水平降低,說明ADAM17介導(dǎo)豬源CD163的剪切調(diào)控。
  最后,在HEK293/CD163細(xì)胞系和PAM進(jìn)行接毒實(shí)驗(yàn),測定ADAM17介導(dǎo)的CD163表達(dá)對PRRSV感染的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6、發(fā)現(xiàn),當(dāng)用ADAM17抑制劑抑制ADAM17活性或者通過siRNA基因干擾下調(diào)ADAM17表達(dá)時(shí),病毒感染量增多;當(dāng)用LPS激活A(yù)DAM17活性或通過基因過表達(dá)提高ADAM17表達(dá)時(shí),病毒感染量減少。上述研究發(fā)現(xiàn)表明ADAM17通過調(diào)控細(xì)胞表面豬源CD163表達(dá)水平從而影響PRRSV入侵細(xì)胞的能力。
  總之,本研究通過流式細(xì)胞術(shù)和G418加壓篩選方法獲得了穩(wěn)定表達(dá)CD163的HEK293/CD163細(xì)胞系,并通過間接免疫熒光發(fā)鑒

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