單管PCR定量檢測K-ras基因第12、13密碼子突變方法的建立及胰腺癌診斷價(jià)值評(píng)價(jià).pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文單管PCR定量檢測Kras基因第12、13密碼子突變方法的建立及胰腺癌診斷價(jià)值評(píng)價(jià)姓名：唐旖旎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)(消化系病)指導(dǎo)教師：李兆申201206第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文立一種能同時(shí)定量檢測Kras基因第12密碼子及13密碼子突變的PCR方法，并將其應(yīng)用于胰腺癌、慢性胰腺炎及正常人群中的外周血標(biāo)本檢測，評(píng)價(jià)其檢測效率以及鑒別診斷胰腺痛的價(jià)值。一、單管PCR定量檢測Kras基因第12、13密碼子突變方

2、法的建立’目的：建立單管PCR定量檢測Kras基因第12及13密碼子突變的方法，并檢驗(yàn)其靈敏度和特異度。方法：設(shè)計(jì)分別由FAM、VIC及NED標(biāo)記的KrasFAMTagmanMGB探針、K—rasVlCTagmanMGB探針及KrasNEDTagmanMGB探針。其中KrasFAMTagmanMGB探針為針對(duì)Kras基因第12密碼子六種突變類型的簡并探針，KrasVICTagmanMGB探針為針對(duì)Kras基因第13密碼子六種突變類型的簡

3、并探針，KrasNEDTagmanMGB探針為針對(duì)Kras基因第12、13密碼子野生型的探針；設(shè)計(jì)針對(duì)野生型Kras基因第12、13密碼子的PNA。通過制備野生型和Kras基因第12、13密碼子突變型的基因標(biāo)準(zhǔn)品，并進(jìn)行倍比稀釋，進(jìn)行絕對(duì)定量。在本實(shí)驗(yàn)室原PCR檢測方法的基礎(chǔ)上，進(jìn)行引物、MIX酶的優(yōu)化以及探針敏感性特異性和鑒別能力的檢測。結(jié)果：單管PCR定量檢測Kras基因第12及13密碼子突變的方法能夠分別有效地檢測Kras基因第1

4、2密碼子的突變類型及第13密碼子的突變類型，并且具有較高的檢測靈敏度。通過運(yùn)用此檢測方法對(duì)胰腺癌細(xì)胞株DNA進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果和測序結(jié)果完全吻合，由此證實(shí)此檢測方法具有良好的應(yīng)用性。結(jié)論：單管PCR定量檢測Kras基因第12及13密碼子突變方法可有效地檢測Kras基因第12及13密碼子突變，并且具有較高的靈敏度和特異性。二、胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人群外周血中K—ras基因第12及13密碼子突變的定量檢測及意義目的：通過對(duì)胰腺癌、慢性胰