電化學(xué)傳感技術(shù)檢測(cè)胰腺癌特異性標(biāo)記物：K-ras基因和胰蛋白酶.pdf

1、胰腺癌（pancreatic cancer，PC）是一種常見的高致死率消化道惡性腫瘤。大多數(shù)病人在確診時(shí)已經(jīng)屬于中晚期胰腺癌，無法徹底治療。研究表明，胰腺癌患者K-ras基因突變率達(dá)到90％以上，而且80%的胰腺癌患者外周血中胰蛋白酶水平會(huì)明顯升高。因此，突變型K-ras基因和外周血中胰蛋白酶水平異常變化可以作為早期胰腺癌診斷的依據(jù)。
　　近年來，電化學(xué)生物傳感技術(shù)迅速發(fā)展，在基因診斷、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)以及抗癌藥物篩選等方面發(fā)揮著越

2、來越重要的作用。本文結(jié)合胰腺癌的分子病理學(xué)特點(diǎn)，設(shè)計(jì)了用于早期胰腺癌診斷的電化學(xué)傳感器。主要內(nèi)容如下：
　　第一章構(gòu)建基于E.coliDNA連接酶和AuNPs的電化學(xué)DNA傳感器用于突變型K-ras基因檢測(cè)
　　本章主要構(gòu)建了一種基于E.coliDNA連接酶和AuNPs的電化學(xué)DNA傳感器，以RuHe x為信號(hào)指示體系，通過計(jì)時(shí)庫侖分析法檢測(cè)突變型K-ras基因。利用SEM和UV-VIS對(duì)合成的AuNPs和納米金探針進(jìn)行表征

3、，采用EIS技術(shù)表征傳感器制作過程。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)得突變型K-ras基因的線性范圍為0.1 pM~1000pM，LOD為10fM，并能在含有野生型K-ras基因的雜合體系中準(zhǔn)確檢測(cè)突變型K-ras基因。
　　第二章構(gòu)建基于DNA聚合酶Ⅰ的電化學(xué)DNA傳感器用于突變型K-ras基因檢測(cè)
　　本章主要設(shè)計(jì)了一種基于DN A聚合酶Ⅰ的電化學(xué) DN A傳感器，通過基因雜交、聚合酶Ⅰ的鏈接作用和生物素-親和素系統(tǒng)將HRP固定在修

4、飾電極表面，在TM B檢測(cè)體系中利用電流時(shí)間曲線技術(shù)精確測(cè)定突變型K-ras基因。主要通過EIS對(duì)傳感器制作過程進(jìn)行表征。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)得突變型K-ras基因的線性范圍為0.001 pM~100pM，LOD為0.5fM，優(yōu)于目前用于K-ras基因測(cè)定的其他方法。本方法實(shí)現(xiàn)了在含有野生型K-ras基因的雜合體系中準(zhǔn)確測(cè)定突變型K-ras基因，為臨床檢測(cè)突變型K-ras基因提供了一種新方法。
　　第三章構(gòu)建基于聚硫堇-AuNPs

5、復(fù)合材料為信號(hào)指示的免標(biāo)記型電化學(xué)免疫傳感器用于胰蛋白酶檢測(cè)
　　本章主要建立了一種以聚硫堇-AuNPs復(fù)合材料（PTh-AuNPs）為信號(hào)指示的免標(biāo)記型電化學(xué)免疫傳感器，在 pH5.5的 PBS中，根據(jù)抗原—抗體反應(yīng)固定抗原，通過差分脈沖伏安法精確測(cè)定胰蛋白酶。采用UV-VIS、TEM和XRD對(duì)PTh-AuNPs復(fù)合材料進(jìn)行表征，以及通過AFM對(duì)傳感器制備過程進(jìn)行表征。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)得胰蛋白酶的線性范圍為0.02ng/ml