K-ras突變刺激CDK8表達(dá)從而促進(jìn)胰腺癌上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：胰腺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，腫瘤的難治性與其早期轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。上皮來源惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)重要機(jī)制為腫瘤細(xì)胞的上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）發(fā)生，伴隨著EMT能力增強(qiáng)腫瘤會(huì)顯示出更高的遷移性和侵襲性。因此，通過研究胰腺癌細(xì)胞EMT潛在分子機(jī)制，可能為抑制胰腺癌早期轉(zhuǎn)移從而提高胰腺癌患者的生存率提供潛在的策略。
　　本研究首先在胰腺癌與正常組織中檢測(cè)K-ras的突變及CDK8的表達(dá)情況，并對(duì)它們兩者之間的相關(guān)性進(jìn)行分析；其次

2、，通過在胰腺癌細(xì)胞中過表達(dá)或干擾突變K-ras，從而分析K-ras突變與CDK8表達(dá)之間的關(guān)系及其可能的分子機(jī)制；最后，將所有胰腺癌細(xì)胞系進(jìn)行干擾或過表達(dá)突變K-ras或CDK8，然后分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后胰腺癌細(xì)胞功能學(xué)和相關(guān)分子標(biāo)記物的改變，并進(jìn)一步探討突變 K-ras或CDK8促進(jìn)EMT可能的潛在分子機(jī)制。
　　方法：（1）采用免疫組化和DNA測(cè)序法對(duì)42例胰腺癌及18例正常胰腺組織中 CDK8的表達(dá)和 K-ras的突變情況進(jìn)行檢

3、測(cè)，分析胰腺癌中 K-ras的突變和CDK8表達(dá)之間的關(guān)系。
　　（2）采用病毒轉(zhuǎn)染外源性的干預(yù)突變K-ras的表達(dá)，運(yùn)用共轉(zhuǎn)染及WB技術(shù)進(jìn)一步分析胰腺癌中突變的K-ras是通過何種分子機(jī)制對(duì)CDK8表達(dá)進(jìn)行調(diào)控的。
　?。?）采用病毒轉(zhuǎn)染外源性的干預(yù)突變K-ras或CDK8表達(dá)，通過WB，共轉(zhuǎn)染，CCK8細(xì)胞增殖，細(xì)胞侵襲遷移，細(xì)胞凋亡，免疫熒光等實(shí)驗(yàn)方法，評(píng)估突變K-ras或CDK8表達(dá)的高低對(duì)胰腺癌細(xì)胞分子生物學(xué)及細(xì)胞

4、生物學(xué)的影響及其分子機(jī)制。
　　結(jié)果：（1）CDK8在胰腺癌中為致癌基因，在其形成過程中起著重要作用，但 CDK8表達(dá)水平高低在不同胰腺癌樣品中并不完全一致。其表達(dá)水平高低依賴于K-ras基因是否突變；其在K-ras突變的樣品中表達(dá)要遠(yuǎn)高于K-ras為野生型的樣品。
　?。?）在K-ras突變的細(xì)胞系中CDK8表達(dá)要遠(yuǎn)高于K-ras為野生型的細(xì)胞系，在K-ras基因突變的胰腺癌細(xì)胞中干擾該基因的表達(dá)，會(huì)伴隨著CDK8表達(dá)下降

5、，反之，在野生型K-ras基因的細(xì)胞中過表達(dá)突變的K-ras會(huì)導(dǎo)致CDK8表達(dá)增加。通過外源性基因片段轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)突變的K-ras刺激CDK8的表達(dá)可能是通過調(diào)節(jié)HIF-1α通路而實(shí)現(xiàn)的，而且在體外試驗(yàn)中無論是CDK8或突變的K-ras的過表達(dá)均可以促進(jìn)細(xì)胞增殖并預(yù)防細(xì)胞凋亡。
　?。?）此外，無論是CDK8或突變的K-ras的高表達(dá)均可以促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移，從而促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。上

6、述分子機(jī)制是CDK8或突變的K-ras通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)刺激上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化重要介質(zhì)SNAIL1和ZEB1的表達(dá)而促進(jìn)EMT的。最后，無論是CDK8或突變的K-ras基因的干擾均可以導(dǎo)致胰腺癌細(xì)胞在的BALB/ c裸鼠中生長(zhǎng)減緩，反之，伴隨著CDK8或突變的K-ras的過表達(dá)則可以促進(jìn)胰腺癌在BALB/ c裸鼠中的生長(zhǎng)。
　　結(jié)論：在胰腺癌中，突變的K-ras可以促進(jìn)CDK8的表達(dá)，而且CDK8可以部