兩株乳酸桿菌對(duì)高脂飲食大鼠膽固醇影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分、降膽固醇益生菌株的體外篩選及菌株鑒定
　　 目的：從體檢正常人群的糞便中分離出細(xì)菌菌株,從中體外篩選出有較好降膽固醇能力的菌株并予以鑒定,以利于進(jìn)一步的研究。
　　 方法：以加入膽固醇的MRS培養(yǎng)基為載體,進(jìn)行降膽固醇菌株的篩選,并對(duì)兩株分解膽固醇效果好的細(xì)菌菌株進(jìn)行耐酸耐膽汁及16sDNA部分序列測(cè)定的鑒定。
　　 結(jié)果：篩選出2株降膽固醇能力在30%以上的菌株,降解

2、率是9-41-A 36.8%, M1-16 31.5%。兩株菌均表現(xiàn)出較好的耐酸耐膽汁能力。對(duì)9-41-A和M1-16進(jìn)行鑒定,初步鑒定9-41-A為植物乳桿菌,M1-16為發(fā)酵乳桿菌。
　　 結(jié)論：菌株9-41-A和M1-16在體外培養(yǎng)基中都有較強(qiáng)的降膽固醇能力和耐酸耐膽鹽能力,經(jīng)初步鑒定分別為植物乳桿菌及發(fā)酵乳桿菌。
　　 第二部分、兩株乳酸桿菌對(duì)飲食誘導(dǎo)的高脂血癥SD大鼠模型膽固醇代謝影響的研究
　　 目的

3、：觀察乳酸桿菌9-41-A和M1-16對(duì)高脂飲食喂養(yǎng)的SD大鼠體內(nèi)膽固醇代謝的影響,評(píng)價(jià)其對(duì)高脂血癥SD大鼠模型降膽固醇作用的有效性,從而為篩選到有利于人體的具備降膽固醇功能的菌株,為進(jìn)一步了解其在體內(nèi)的作用機(jī)制提供依據(jù)。
　　 方法：隨機(jī)將40只SD大鼠分為初始體重?zé)o差異的4組,正常飲食組喂養(yǎng)普通飼料,高脂模型組、L.9-41-A組和L.M1-16組喂養(yǎng)高脂飲食,另外分別給L.9-41-A組和L.M1-16組的大鼠添加植物乳桿

4、菌L.9-41-A或發(fā)酵乳桿菌L.M1-16。6周末處死大鼠,檢測(cè)大鼠血脂指標(biāo),血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶,肝脂質(zhì)、糞脂質(zhì),體重增加量,Lee指數(shù),肝指數(shù)、體脂指數(shù),肝組織病理學(xué)檢查,小腸內(nèi)容物菌群分析及糞便水分等指標(biāo)。
　　 結(jié)果：
　　 1、高脂模型組的血清TCH,TG,LDL-C水平較之正常對(duì)照組均有明顯升高(P＜0.05),L.9-41-A組和L.M1-16組的血清TCH,TG,LDL-C水平較之高脂模型組明顯下降,以L.9

5、-41-A組效果較好。各組大鼠間的HDL-C沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　 2、高脂模型組肝臟膽固醇和甘油三酯均比正常對(duì)照組升高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與高脂模型組比較,益生菌L.9-41-A組和L.M1-16組均可降低肝組織中膽固醇和甘油三酯的含量(P＜0.05)。
　　 3、高脂飲食的各組大鼠糞便膽固醇和膽汁酸排出量均高于正常飲食組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩組益生菌組大鼠糞便膽固醇和膽汁酸排出量又高于

6、高脂模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4、肝臟病理檢查,高脂模型組脂肪浸潤(rùn)程度明顯高于正常飲食組。兩組益生菌可以顯著改善肝脂肪浸潤(rùn)。
　　 5、至第6周末各高脂飼料組體重均比正常飼料組增加明顯(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,以高脂模型組和L.M1-16組增加量最多,L.9-41-A組次之。
　　 6、第6周末四組SD大鼠中正常組和L.9-41-A組的Lee’s指數(shù)最低,相較于模型組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P＜0.05)。正常組、L.9-41-A組和L.M1-16組的肝指數(shù)均出現(xiàn)明顯下降(P＜0.05)。正常組的體脂指數(shù)較其他高脂飲食組均小(P＜0.05),模型組的體脂指數(shù)最高,益生菌組較模型組稍低,但組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 7、相較于高脂模型組,兩組益生菌組的大腸桿菌菌落計(jì)數(shù)明顯下降(P＜0.05)。四組SD大鼠小腸內(nèi)容物的腸球菌計(jì)數(shù)無(wú)明顯差異(P＞0.05)。高脂模型組的乳酸桿菌與雙歧桿菌的數(shù)量要明顯

8、低于其他各組,而兩組益生菌組可以明顯增加小腸乳酸菌與雙歧桿菌的數(shù)量(P＜0.05)。
　　 8、第6周末,兩株乳酸桿菌可增加大鼠糞便水分含量(P＜0.05)。
　　 9、四組大鼠間血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、以改良高脂飲食配方連續(xù)喂養(yǎng)SD大鼠6周后,可以成功造出大鼠高膽固醇血癥模型。
　　 2、植物乳桿菌L.9-41-A和發(fā)酵乳桿菌L.M1-16對(duì)SD大鼠高

9、脂血癥模型均有降低膽固醇和甘油三酯的作用,以L.9-41-A菌株較好。L.9-41-A菌可能還具有減輕體重的作用。
　　 3、植物乳桿菌L.9-41-A和發(fā)酵乳桿菌L.M1-16增加了高脂飼料大鼠糞便中的膽固醇和膽汁酸排出量。
　　 4、兩株乳酸桿菌能夠改善調(diào)節(jié)SD大鼠腸道內(nèi)菌群,表現(xiàn)為增加乳酸桿菌和雙歧桿菌的菌落數(shù)。
　　 第三部分、兩株乳酸桿菌對(duì)高膽固醇血癥大鼠膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　 目的

10、：探討植物乳桿菌L.9-41-A和發(fā)酵乳桿菌L.M1-16對(duì)高脂血癥SD大鼠模型膽固醇及膽汁酸代謝途徑中部分相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響,以進(jìn)一步了解乳酸菌發(fā)揮降膽固醇作用的體內(nèi)可能機(jī)制。
　　 方法：第6周末處死大鼠,低溫保存各組肝臟及回腸粘膜上皮標(biāo)本,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠肝臟3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶HMGCR,低密度脂蛋白受體LDL-R,膽固醇7α-羥化酶CYP7A1及回腸法尼酯受體FXR mRNA

11、的相對(duì)表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、與正常飼料組的大鼠比較,各高脂飼料組的大鼠肝臟HMGCR表達(dá)量都明顯降低,各高脂飼料組中以L.9-41-A組最低,而高脂模型組與L.M1-16組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)
　　 2、較之正常飼料組的大鼠,高脂模型組的大鼠肝臟LDL-R的表達(dá)量要明顯降低,而兩株益生菌組對(duì)大鼠肝臟LDL-R mRNA的表達(dá)有著極為明顯的上調(diào)作用(P＜0.05)。
　　 3、較之正常飼

12、料組的大鼠,高脂模型組和兩株益生菌組的大鼠肝臟CYP7A1的表達(dá)量均明顯上升,以益生菌L.9-41-A組上升幅度最大(P＜0.05)。
　　 4、與正常飲食組的大鼠比較,高脂模型組大鼠回腸CYP7A1表達(dá)量明顯上升,益生菌L.9-41-A組和益生菌L.M1-16組的表達(dá)量上升幅度更大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：菌株9-41-A和M1-16可能是通過(guò)直接或間接抑制肝臟HMGCR,上調(diào)肝臟LDL-R和