Mfat-1小鼠膽固醇代謝特點(diǎn)及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、【目的】
　　觀察攜帶ω-3脂肪酸不飽和酶（fat-1）基因從而使體內(nèi)ω-6/ω-3多不飽和脂肪酸比例趨于平衡的mfat-1小鼠，在高脂飲食后血清膽固醇水平、膽固醇合成與吸收效率的改變，以探討ω-3多不飽和脂肪酸對膽固醇代謝的相關(guān)機(jī)制。
　　【方法】
　　1.將mfat-1小鼠（由南京醫(yī)科大學(xué)趙子健、戴一凡教授饋贈）與C57BL/6小鼠雜交繁殖，提取鼠尾基因組DNA，半定量RT-PCR鑒定子代小鼠目的基因的表達(dá)。

2、>　　2.隨機(jī)挑選8周齡mfat-1及C57BL/6雄性小鼠各12只分別作為實(shí)驗(yàn)組和對照組，普通飲食適應(yīng)性喂養(yǎng)2周改為高脂飼料，4周后通過心臟采血并剪取肝臟組織，進(jìn)行檢測。
　　3.氣相色譜分析法檢測小鼠血清總膽固醇、膽固醇代謝標(biāo)志物水平，用外標(biāo)單點(diǎn)法定量測定血清中膽固醇含量；內(nèi)標(biāo)單點(diǎn)法定量測定膽固醇合成標(biāo)志物（角鯊烯、2,4-脫氫膽甾烷醇）及吸收標(biāo)志物（菜油固醇、β-谷固醇、豆固醇）含量。
　　4.氯仿-甲醇提取法提取肝臟

3、組織中的脂質(zhì)，酯化后進(jìn)行氣相色譜分析，通過將保留時間與標(biāo)準(zhǔn)品對比，分析小鼠肝臟膜脂質(zhì)內(nèi)二十碳五烯酸(eicosapentaenoicacid，EPA）、二十二碳六烯酸（docosahexenoic acid，DHA）、二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid，DPA）、α-亞麻酸（α-linolenic acid，ALA）、亞油酸（linoleic acid，LA）、花生四烯酸（arachidonic acid，AA）

4、的百分含量。
　　5.ELISA定量分析檢測小鼠肝臟中膽固醇合成限速酶3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme Areductase，HMG-COAR）的水平。
　　【結(jié)果】
　　1.半定量PCR鑒定ω-3脂肪酸去飽和酶（fat-1）基因在子代mfat-1小鼠中成功表達(dá)。
　　2.實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟脂質(zhì)內(nèi)總ω-3多不飽和脂肪酸（polyunsatur

5、ated fatty acids，PUFAs）的百分含量為8.06±0.76，總ω-6PUFAs百分含量為13.71±0.98，總ω-6/ω-3PUFAs比例顯著低于對照組（1.70vs.6.04 p<0.01）。
　　3.實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中總膽固醇水平較對照組降低（0.91±0.07比1.16±0.85,p＜0.01,mg/mL）。膽固醇合成標(biāo)志物（角鯊烯、2,4-脫氫膽甾烷醇）水平明顯低于對照組（分別為0.63±0.17vs.1

6、.24±0.36，3.89±0.54vs.6.57±1.06 p<0.05,ug/mL），膽固醇吸收標(biāo)志物（菜油固醇、β-谷固醇、豆固醇）水平也顯著低于對照組（分別為16.10±2.28比21.24±2.96、1.07±0.18比1.76±0.43、28.78±5.60比42.30±5.81,p＜0.01,ug/mL）。
　　4.肝臟內(nèi)膽固醇合成限速酶3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的水平較對照組顯著降低（379.76±22.