基于活化HIV前病毒的中藥分子篩選及初步驗證.pdf

1、[目的]
　　本項目擬在細胞模型上篩選能活化HIV潛伏病毒庫的中藥活性分子，并從分子水平進一步驗證其對HIV潛伏病毒庫的活化效能，初步探討其活化HIV潛伏庫的作用機制，為后續(xù)開發(fā)具有高效激活效能的藥物提供實驗依據(jù)。
　　[方法]
　　本實驗室所需2株艾滋病毒潛伏細胞模型J-lat GFP clone A72和J-lat full length clone10.6由香港大學艾滋病研究所惠贈。特定濃度的中藥分子溶液作用J-

2、lat GFP clone A72模型，運用流式細胞儀檢測該細胞模型中綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)的熒光強度變化;將初篩得到的中藥活性分子作用于細胞模型J-lat full length clone10.6，流式細胞儀檢測GFP熒光強度、酶聯(lián)免疫吸附法檢測艾滋病毒的標志性蛋白P24的相對含量、流式細胞儀檢測細胞模型細胞周期變化;并將中藥活性分子作用人外周血，流式細胞儀檢測淋巴細胞活化分子CD

3、69、CD38和HLA-DR的表達變化。
　　[結(jié)果]
　　1.通過J-lat GFP clone A72細胞模型已篩選得到具有活化作用的中藥分子，以白藜蘆醇和鹽酸小檗堿作為代表性藥物，作用強度分別為對照組的2.19倍和2.00倍。
　　2.白藜蘆醇和鹽酸小檗堿分別作用于J-lat full length clone10.6細胞模型后，酶聯(lián)免疫吸附實驗結(jié)果表明P24蛋白相對含量與藥物濃度存在劑量依賴關(guān)系，且P24相對含

4、量與GFP熒光強度也具有明顯相關(guān)性。
　　3.鹽酸小檗堿能影響J-lat full length clone10.6細胞的細胞周期，使G1期細胞減少，G2期細胞增多。
　　4.血液學實驗表明白藜蘆醇能刺激淋巴細胞早期活化分子CD69的表達，中晚期活化分子CD38、HLA-DR無顯著變化。
　　[結(jié)論]
　　鹽酸小檗堿和白藜蘆醇在體外細胞模型中具有抗HIV潛伏作用;血液學的探討性實驗表明白藜蘆醇可能具有促進淋巴細胞