抗新城疫病毒中藥多糖的篩選.pdf

1、新城疫（Newcastledisease，ND）是對養(yǎng)雞業(yè)危害較嚴(yán)重的傳染病之一，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。目前對于新城疫的治療，缺乏有效的治療藥物。中藥多糖具有增強免疫力、抗病毒等多效性作用，且具有低毒，低耐藥性的特點，在治療雞新城疫疾病方面顯示出巨大的潛力。
　　 本試驗選定8種含有多糖的中藥為藥效跟蹤研究對象，對8種中藥進行多糖提取、純化多糖，采用氯磺酸.吡啶法對多糖進行硫酸化修飾，采用體外細胞培養(yǎng)法研究8種中藥多糖抗

2、新城病毒的活性；在此基礎(chǔ)上，對具有抗病毒活性的大黃多糖提取工藝進行了深入研究，并通過凝膠層析法對大黃多糖進行分級，對多糖結(jié)構(gòu)進行了初步測定，主要研究內(nèi)容如下：
　　 采用傳統(tǒng)水提醇沉法提取8種中藥的多糖成分，采用氯磺酸-吡啶法對8種多糖進行硫酸化修飾，在建立的雞胚成纖維細胞篩選平臺上，體外試驗初步篩選出對新城疫病毒有抵抗作用的多糖，并且比較修飾前后抗病毒活性的變化。結(jié)果顯示，8種多糖均具有一定抗病毒活性，以黃芪多糖效果最明顯，當(dāng)

3、歸多糖，板藍根多糖次之，紫草及黃精多糖效果不顯著。通過硫酸化修飾，提高了當(dāng)歸、牛膝及大黃多糖的抗病毒活性，表現(xiàn)強抗NDV作用在單因素考察的基礎(chǔ)上，正交設(shè)計試驗優(yōu)化超聲法提取大黃多糖的條件，超聲提取法的最優(yōu)多糖提取參數(shù)為：pH值9.0，料液比1:40，溫度40℃，時間50min。在該條件下大黃多糖提取率42.27％及多糖含量13.11％，與傳統(tǒng)水提醇沉法提取大黃多糖法的提取率38.10％及多糖含量5.06％比較，超聲法顯著優(yōu)于傳統(tǒng)提取法，

4、并且超聲法更節(jié)能，高效，不易破壞多糖結(jié)構(gòu)。用SephadexG-50及SephadexG-100凝膠對大黃多糖進行分子量分級得到單一洗脫峰，表明大黃多糖主要由一種多糖組成。
　　 對大黃多糖及其修飾物進行紫外光譜分析，發(fā)現(xiàn)在190～220nm處均有一強吸收峰，表明檢測樣品為多糖類物質(zhì)，硫酸化大黃多糖在265nm有明顯的-SO3的特征吸收峰。通過硫酸鋇明膠比濁法對氯磺酸-吡啶法修飾的大黃多糖進行SO42-含量及取代度測定，通過穩(wěn)定

5、性試驗確定反應(yīng)后20min為最佳測定時間。硫酸化修飾的大黃多糖中SO42-含量6.04％，SD為0.38，回收率為90％。
　　 通過薄層色譜分析大黃多糖的單糖組成包括葡萄糖醛酸、葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖。通過紅外光譜分析，硫酸化大黃多糖增加了1156.6cm-1、885.5cm-1和816.1cm-1的吸收峰，證明硫酸基已與多糖結(jié)合成酯，光譜分析說明大黃多糖具有吡喃糖苷，是一種含有糖醛酸的吡喃型多糖，由a-D-吡喃葡萄糖