抗新城疫病毒中藥活性組分篩選的研究.pdf

1、本研究探尋了中藥抗新城疫病毒的有效組分,為開發(fā)新型、有效、環(huán)保的中藥抗病毒藥物奠定基礎(chǔ)。試驗(yàn)方法:收集治療畜禽病毒病的中藥處方,將出現(xiàn)頻率高的4種抗病毒中草藥(黃芪、黃芩、黃連、大青葉)作為提取有效組分的試驗(yàn)材料。將中藥粉碎后用乙酸乙酯和乙醇浸提,提取物作為醇提物,將每種中藥的醇提物濃縮干燥后經(jīng)過硅膠層析柱分離后,收集20種不同極性的洗脫組分,再次濃縮干燥,作為抗病毒所需篩選的藥物。
　　 利用Marc145細(xì)胞建立抗新城疫病毒

2、的細(xì)胞篩選模型,設(shè)立預(yù)防組、治療組、自愈組和空白對(duì)照組。預(yù)防組:細(xì)胞培養(yǎng)20h后更換含適量預(yù)防藥物的維持液,繼續(xù)培養(yǎng)8h后感染新城疫病毒,再培養(yǎng)22h后利用MTT染色法測(cè)定結(jié)果；治療組:細(xì)胞培養(yǎng)28h后與預(yù)防組、自愈組同時(shí)感染新城疫病毒,繼續(xù)培養(yǎng)8h后更換含治療藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液,再培養(yǎng)14h后測(cè)定結(jié)果:自愈組:在細(xì)胞培養(yǎng)28h后感染病毒,用維持液代替用藥處理；空白對(duì)照組:用維持液代替病毒感染和用藥處理。觀察細(xì)胞病變及死亡狀況,利用MTT

3、染色法測(cè)定結(jié)果。MTT染色法能定量檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性,來間接反應(yīng)藥物的抗病毒效果。為此我們將MTT作為細(xì)胞培養(yǎng)物中病毒增殖情況的指示系統(tǒng)。
　　 試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.中藥活性組分的提取:使用200-300目的硅膠進(jìn)行硅膠柱層析,成功從黃芪、黃芩、黃連、大青葉的醇提物中分離出共80種不同極性的組分。
　　 2.建立抗病毒模型:利用Marc145細(xì)胞感染新城疫病毒,感染后22h出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變,建立了抗病毒藥

4、物篩選模型。
　　 3.活性組分的抗病毒效果:
　　 黃芪提取物中預(yù)防組有4種組分對(duì)病毒具有抑制作用,OD值均與接毒對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。治療組中有5種組分抑制效果明顯,且OD值均與接毒對(duì)照組差異極顯著(P<0.01),表明黃芪的醇提取物中有些組分有顯著抗病毒作用。
　　 黃芩提取物中預(yù)防組有5種組分對(duì)病毒具有抑制作用,其中16號(hào)組分OD值與接毒對(duì)照組差異顯著(P<0.05),其它4種組分OD值與接毒

5、對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。治療組中7號(hào)組分OD值與接毒對(duì)照組差異顯著,其他5種組分抑制效果更明顯,OD值與接毒對(duì)照差異極顯著(P<0.01)。表明黃芩的醇提取物中有些組分有顯著的抗病毒作用。
　　 黃連醇提取物中預(yù)防組有4種組分對(duì)病毒具有抑制作用,其OD值與接毒對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。治療組中有3種組分治療效果明顯,OD值與接毒對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。表明黃連的醇提取物中有些組分有顯著抗病毒作用。

6、r>　　 大青葉醇提取物中預(yù)防組有3種組分對(duì)病毒具有抑制作用,OD值與接毒對(duì)照差異極顯著(P<0.01)。治療組中有4種組分對(duì)新城疫病毒有治療效果,OD值與接毒對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。表明大青葉的醇提取物中有些組分有顯著抗病毒作用。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明,利用Marc145細(xì)胞所建立的篩選模型能夠有效篩選出中藥的抗病毒有效組分,利用活性組分篩選模型分別從黃芪、黃芩、黃連、大青葉等中藥醇提取物中篩選出多種具有明顯抗病毒作