牛分枝桿菌BCG菌株3-甲基腺嘌呤糖基化酶AAG的調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、堿基切除修復(fù)(BER)是生物體內(nèi)廣泛存在的一種DNA損傷修復(fù)機(jī)制，能夠使機(jī)體有效應(yīng)對各種內(nèi)源或外源因素引發(fā)的堿基損傷。3-甲基腺嘌呤DNA糖基化酶AAG能夠識別并切除受損堿基，在堿基切除修復(fù)系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。然而，作為引起結(jié)核病的結(jié)核分枝桿菌，其AAG的調(diào)控機(jī)制仍然不是很清楚。牛分枝桿菌BCG菌株（BacillusCalmetteGuerin，卡介苗菌株）在過去的七十多年里廣泛作為預(yù)防結(jié)核病的疫苗，是對抗結(jié)核病的重要武器，同時(shí)它與病原

2、菌結(jié)核分枝桿菌基因組具有高度同源性，因此被廣泛作為研究結(jié)核分枝桿菌基因調(diào)控的模式菌株。本研究綜合運(yùn)用多種技術(shù)手段，重點(diǎn)研究了(B)CG菌株中AAG的雙重調(diào)控機(jī)制，主要包括以下內(nèi)容:
　　(1)通過細(xì)菌單雜交篩選發(fā)現(xiàn)和鑒定了一個(gè)TetR家族的轉(zhuǎn)錄因子BCG0878c，并進(jìn)一步用EMSA和ChIP實(shí)驗(yàn)證明BCG0878c能夠直接結(jié)合牛分枝桿菌aag基因（mbaag）的啟動子。運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)和半乳糖苷酶實(shí)驗(yàn)證明BCG0878c能

3、夠下調(diào)mbaag基因的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)自身基因表達(dá)。用啟動子分段截短EMSA實(shí)驗(yàn)和DNase(Ⅰ)足跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步鑒定了BCG0878c所識別的保守DNA序列。
　　(2)采用細(xì)菌雙雜交、免疫共沉淀、表面等離子共振、pull-down等技術(shù)手段證明BCG0878c蛋白質(zhì)能夠與MbAAG相互作用。BCG0878c能夠促進(jìn)MbAAG結(jié)合受損DNA，同時(shí)亦能促進(jìn)MbAAG對受損堿基的切割。而MbAAG反過來能夠促進(jìn)BCG0878c的DNA結(jié)