利用高通量技術(shù)手段研究急性髓系白血病中常見融合蛋白AML1-ETO的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制.pdf

1、由染色體易位形成的融合蛋白是白血病發(fā)生的重要原因之一，因此融合蛋白在白血病發(fā)病中的作用一直是重要的研究方向，然而對于融合蛋白所累及的野生型蛋白在相關(guān)白血病發(fā)病中所起的作用人們卻知之甚少。近年來的一些研究提示融合蛋白所影響的野生型蛋白可能在白血病的發(fā)生和維持中也起一定的作用。本研究以異常融合蛋白AML1-ETO與正常髓系分化的重要轉(zhuǎn)錄因子AML1為研究對象，分別通過研究兩者在全基因組水平結(jié)合的關(guān)系以及對下游靶基因的調(diào)控方面來闡述異常融合蛋

2、白及其累及的正常轉(zhuǎn)錄因子在急性髓系白血病發(fā)病中的作用。
　　我們利用高通量的染色質(zhì)免疫共沉淀-測序列技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation-Sequencing,ChIP-seq）獲得了t（8；21）病人細(xì)胞系Kasumi-1中AML1-ETO和AML1在全基因組上的靶位點(diǎn)數(shù)據(jù)。ChIP-seq數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示兩者的結(jié)合位點(diǎn)存在很大程度的重合，并且AML1-ETO和AML1之間通過各自的RHD（Runt

3、homology domain）結(jié)構(gòu)域存在直接相互作用。對兩者共結(jié)合的位點(diǎn)的分析表明，部分位點(diǎn)上AML1-ETO的信號明顯高于AML1，部分位點(diǎn)上AML1-ETO的信號明顯低于AML1。進(jìn)一步對這兩部分位點(diǎn)進(jìn)行motif分析，結(jié)果表明AML1信號高的位點(diǎn)主要富集出經(jīng)典的AML1 motif(AAACCACA)，而AML1-ETO信號高的位點(diǎn)主要富集出變異的AML1 motif(ACCACAG)。最后結(jié)合轉(zhuǎn)錄組的RNA-seq數(shù)據(jù)，我們發(fā)

4、現(xiàn)AML1-ETO對基因的激活與較高的AML1結(jié)合信號相關(guān)，而AML1-ETO對基因的抑制則與較高的AML1-ETO結(jié)合信號相關(guān)。同時AML1-ETO可能通過與AML1以及AP-1，ERG形成復(fù)合物激活下游靶基因的表達(dá)，它們可能通過與PU.1以及E-box形成復(fù)合物抑制下游靶基因的表達(dá)。這些結(jié)果在全基因組水平上證明了AML1-ETO與AML1在不同靶基因上形成的不同的結(jié)合平衡狀態(tài)以及對不同轉(zhuǎn)錄因子的募集與其對下游靶基因的調(diào)控密切相關(guān)。這