APP基因調(diào)控AML1-ETO+白血病細(xì)胞遷移及其分子機制研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 0 級博士學(xué)位論文A P P 基因調(diào)控A M L l ／E T O + 白血病細(xì)胞遷移及其分子機制研究S t u d i e so f A P P G e n e o nR e g u l a t i o no fA M L l ／E T O +L e u k e m i a C e l l s M i g r a t i o na n d I t sM o l e c u l a rM e c h a n i

2、s m s課題來源： 教育部高校博士點專項科研基金( 編號：2 0 1 2 4 4 3 3 1 1 0 0 0 1 )學(xué)位申請人導(dǎo) 師 姓 名專 業(yè) 名 稱培 養(yǎng) 類 型培 養(yǎng) 層 次所 在 學(xué) 院蔣玲孟凡義、馬文麗血液內(nèi)科學(xué)統(tǒng)招全日制博士第一臨床醫(yī)學(xué)院2 0 1 3 年0 5 月1 0 日 廣州摘要研究內(nèi)容和方法1 ．驗證k a s u m i ．1 細(xì)胞符合A M L I ／E T O + ．A M L 的細(xì)胞模型應(yīng)用瑞氏．吉姆薩染

3、色和過氧化物酶染色檢測k a s u m i ．1 細(xì)胞符合急性髓系白血病細(xì)胞的形態(tài)特征；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測k a s u m i ．1 細(xì)胞表面的分子標(biāo)記；利用F I S H 和染色體核型分析驗證k a s u m i ．1 細(xì)胞具有t ( 8 ：2 1 ) 核型和A M L l ／E T O + 遺傳學(xué)特征。2 ．構(gòu)建質(zhì)粒載體，包裝病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞根據(jù)s i R N A 設(shè)計原則，針對A P P 目的基因所有轉(zhuǎn)錄本共同區(qū)域的3 個靶

4、點設(shè)計3 條s h R N A 序列，即s i R N A ．1 、s i R N A ．2 、s i R N A ．3 。構(gòu)建靶向A P P 的s h R N A 慢病毒干擾載體，穩(wěn)定干擾高表達(dá)A P P 基因的白血病細(xì)胞株k a s u m i ．1 。利用流式細(xì)胞術(shù)分選出G F P 陽性細(xì)胞，體外擴增培養(yǎng)。應(yīng)用熒光定量P C R和W e s t e r n ．B l o t 技術(shù)檢測3 對s i R N A ／A P P 對k a

5、 s u m i ．1 細(xì)胞的干擾效果，選取干擾效果最好的細(xì)胞作為s i A P P 實驗組用于后續(xù)實驗研究。3 ．A P P 基因?qū)Π籽〖?xì)胞功能的研究( 1 ) 實驗分組：野生型組( w i l d ) 、轉(zhuǎn)染s c r a m b l e 序列的對照組( N C ) 、轉(zhuǎn)染干擾A P P 基因序列組( s i A P P ) 。( 2 ) 驗證干擾效果熒光定量P C R 和W e s t e r n —B l o t 技術(shù)檢測上述

6、三組細(xì)胞A P Pm R N A 和蛋白的表達(dá)，明確干擾效果。( 3 ) 抑制A P P 基因的表達(dá)對白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響利用C C K ．8 法、流式細(xì)胞術(shù)、T r a n s w e l l 小室遷移實驗等觀察A P P 表達(dá)抑制后細(xì)胞增殖、凋亡及遷移能力的變化。進(jìn)一步明確A P P 基因在白血病細(xì)胞中的生物學(xué)功能。4 ．A P P 介導(dǎo)的分子基礎(chǔ)初步研究利用熒光定量P C R 和W e s t e r n ．B l o t