抗核小體抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的診斷意義及表達(dá)特異性膜抗體的B細(xì)胞系的建立.pdf

1、本論文分為三個(gè)部分，第一部分是抗核小體抗體和兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種全身性自身免疫病，本病的病理過程中伴有明顯的B淋巴細(xì)胞的活化?；颊哐逯锌沙霈F(xiàn)多種自身抗體，并因此導(dǎo)致組織和器官的損傷。自身抗體包括：DNA，組蛋白，非組蛋白和核小體等。核小體是SLE的自身免疫原，是多種抗核抗體出現(xiàn)的根源。我們檢測(cè)了52例SLE兒童的血清，其中18例抗核小體抗體(AnuA)陽(yáng)性。27例疾病對(duì)照組中1例AnuA陽(yáng)性，

2、30例正常對(duì)照組AnuA均為陰性。AnuA在兒童SLE中的敏感性為34.6％，特異性為96.3％?？筪sDNA抗體、抗心磷脂抗體陰性的SLE患兒AnuA陽(yáng)性率分別為33.3％和25％。因此AnuA對(duì)兒童SLE的診斷具有較高的特異性，有助于抗dsDNA抗體、抗心磷脂抗體陰性的兒童SLE的診斷。 第二部分是用EB病毒轉(zhuǎn)化人外周血B淋巴細(xì)胞，從而建立自身免疫病細(xì)胞系。同SLE一樣，重癥肌無(wú)力(MG)也是自身免疫性疾病，MG主要累及神經(jīng)

3、肌肉接頭處突觸后膜上AchR，早期或晚期重癥肌無(wú)力患者中85％-90％為AchR抗體陽(yáng)性。本實(shí)驗(yàn)采用可向培養(yǎng)基中釋放EB病毒顆粒的B95-8細(xì)胞上清轉(zhuǎn)化人外周血B淋巴細(xì)胞，體外建立了SLE和MG兩種自身免疫病的永生化淋巴母細(xì)胞系(LCL)。進(jìn)一步，我們將轉(zhuǎn)化后的B淋巴細(xì)胞用半固體培養(yǎng)基將細(xì)胞克隆化培養(yǎng)，以期篩選出可以表達(dá)膜自身抗體的B細(xì)胞系。但是，由于病理性B細(xì)胞在整個(gè)B細(xì)胞庫(kù)中所占比例過少，同時(shí)又由于患者血樣較難采集，無(wú)法對(duì)更多血樣進(jìn)

4、行轉(zhuǎn)化，因此，沒有通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法得到表達(dá)膜自身抗體的B細(xì)胞系。 在第三部分工作中，我們用實(shí)驗(yàn)性重癥肌無(wú)力造模的大鼠和小鼠為B細(xì)胞來(lái)源，尋找表達(dá)膜自身抗體的B細(xì)胞。應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，我們建立了大鼠骨髓和脾細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞株以及小鼠脾融合的雜交瘤細(xì)胞株，通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳、流式細(xì)胞術(shù)、WesternBlotting、質(zhì)譜分析等方法證明了雜交瘤細(xì)胞既可以分泌抗體又可以表達(dá)膜抗體，這種特性是在細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后獲