X射線和喜樹堿對外周血淋巴細胞不同細胞亞群生物學效應的研究.pdf

1、腫瘤是嚴重威脅人類健康的重大疾病，其發(fā)病率逐年呈上升趨勢。目前，惡性腫瘤主要以外科手術為治療手段，術后合并放療和化療等綜合治療。一直以來細胞增殖過多而細胞凋亡過少被認為是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因。越來越多的資料表明，腫瘤是一類細胞周期性疾病。細胞死亡規(guī)律是臨床設計放化療方案的重要依據(jù)，不同細胞周期內的腫瘤細胞接受放化療后，療效差別卻很大。
　　 近些年來，一些科學家發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞這個快速增殖的群體中存在著一群處于靜止期的細胞，這群處

2、于靜止期的細胞在放化療的打擊下的細胞凋亡率與處于不斷增殖的腫瘤組織細胞對各種打擊因素的反應也各不相同，而另一些研究者所關注的側群干細胞（SP）及腫瘤干細胞（CSC）也是處于靜止期細胞。
　　 然而進一步的研究發(fā)現(xiàn)，這些處于靜止期的細胞群是與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展甚至耐藥和腫瘤復發(fā)緊密相關。因此，研究腫瘤細胞不同細胞亞群在放化療打擊下的損傷修復反應及其死亡規(guī)律是腫瘤研究的熱點和焦點。我們以正常人外周血淋巴細胞為模型構建不同的細胞周期狀態(tài)

3、來分別研究不同亞群的腫瘤細胞在放化療打擊下的損傷修復反應及其死亡規(guī)律。在過去的三十年里，少有研究靜止狀態(tài)和增殖狀態(tài)的人外周血淋巴細胞（PBLs）對外界刺激的反應能力，他們僅用堿性彗星電泳從流行病學角度簡單地加以分析。
　　 而在本研究中，選用γH2AX 標志物分析不同細胞周期狀態(tài)PBLs DNA損傷反應來闡明其對放化療的敏感性。γH2AX 形成必然反映DNA損傷，化療藥物喜樹堿和X 射線作用于G0 期和經(jīng)PHA 誘導增殖的PBL

4、s 時，免疫印記及流式結果均顯示增殖期的PBLs γH2AX表達較靜止期多，這表明增殖期PBLs 較靜止期損傷更明顯，放化療敏感性更顯著。同時通過兩組凋亡率的比較也發(fā)現(xiàn)，增殖期細胞的死亡更多，其相關蛋白Bcl-2，caspase-9和caspase-3的表達也與該現(xiàn)象相符。為了明確H2AX在上述生物過程中的作用，通過RNAi 技術在293T中抑制H2AX的表達，發(fā)現(xiàn)其對CPT和X-ray 誘導的凋亡無顯著影響，故H2AX 可能僅作為DN