RACK1在膠質(zhì)瘤中的表達及其功能的實驗研究.pdf

1、背景:腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤。手術(shù)徹底切除困難，且其生長迅速，術(shù)后易復發(fā)，復發(fā)間隔時間短，預(yù)后差。高級別膠質(zhì)瘤平均生存期仍然在一年左右。膠質(zhì)瘤生物遺傳學及分子生物學的研究進展，揭示了膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展同樣是一個復雜的生物學過程，涉及到許多相關(guān)基因的異常表達。因此積極地探索膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展的分子生物學機制對指導臨床治療具有重要的意義。已有研究證實了RACK1基因在細胞的生長、分化、惡變、轉(zhuǎn)移、侵襲等方面發(fā)揮了關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用

2、，但該基因如何調(diào)控并作用于神經(jīng)上皮組織，與膠質(zhì)瘤發(fā)生，發(fā)展的關(guān)系究竟如何，以及與膠質(zhì)瘤生物學行為的相關(guān)性等問題，目前國內(nèi)外尚未見系統(tǒng)的研究和報道。我們推測RACK1基因可能參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程并發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用，RACK1基因可能具有成為膠質(zhì)瘤靶向治療新靶點的應(yīng)用前景，可能給臨床基因診斷及預(yù)后評價提供參考。
　　目的:
　　探討RACK1基因在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達情況及與病理分級關(guān)系。通過瞬時和穩(wěn)定RNA干擾技術(shù)

3、在人膠質(zhì)瘤細胞株中下調(diào)RACK1的表達，探討RACK1對膠質(zhì)瘤細胞生長、增殖、遷移、凋亡等多種生物學特性的影響，并初步分析其發(fā)揮作用的分子生物學機制，結(jié)合臨床病理初步評價其臨床應(yīng)用前景。
　　方法:
　　對收集的45例各級別臨床膠質(zhì)瘤及10例正常腦組織標本以及U87-MG，CHG-5細胞株進行Real-Time PCR和Western-Blot分別檢測RACK1 mRNA和蛋白的表達水平，證實了RACK1在人腦膠質(zhì)瘤中的異常

4、高表達，然后用siRNA瞬時干擾U87-MG，CHG-5細胞株中RACK1的基因，觀察RACK1基因干擾前后膠質(zhì)瘤細胞株生物學特性（增殖，侵襲，凋亡等）的改變，再通過慢病毒為載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染U87-MG細胞株后，RACK1表達下調(diào)后進行裸鼠成瘤試驗，于體內(nèi)進一步證實RACK1對膠質(zhì)瘤增殖的調(diào)控作用，最后初步探討其調(diào)控膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展的機制，并結(jié)合臨床病理資料，來評價RACK1用于人腦膠質(zhì)瘤中基因診斷及治療的潛在價值。
　　結(jié)果:

5、>　　結(jié)果顯示低級別膠質(zhì)瘤RACK1表達較正常腦組織增高有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，高級別膠質(zhì)瘤和正常腦組織統(tǒng)計學差異更為顯著(P＜0.01)，低級別與高級別膠質(zhì)瘤之間亦有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)RACK1的表達增高和膠質(zhì)瘤病理級別正相關(guān)。U87-MG和CHG-5細胞株中RACK1的表達也較正常明顯升高。RACK1經(jīng)RNAi后，細胞的抗凋亡及遷移侵襲能力形成明顯受到抑制(P＜0.01)，并降低了細胞株的增殖率(P＜0.05)，裸鼠成

6、瘤試驗中，經(jīng)慢病毒介導的shRNA干擾后，U87-MG細胞株成瘤與對照組同時期內(nèi)瘤體相比明顯減小，成瘤速度也明顯減慢，結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。RACK1經(jīng)siRNA干擾后，無論U87-MG還是CHG-5其Bcl-2的表達均明顯下降，Bax的表達顯著升高(P＜0.01)，Bcl-2/Bax比值也明顯下降，siRNA下調(diào)了RACK1的表達后檢測Src/Akt磷酸化，兩者在兩組細胞株中均顯著的表達下調(diào)（P＜0.01和P＜0.05）。