二花臉和皮特蘭兩品種仔豬心臟和腎臟的運(yùn)輸應(yīng)激性損傷與Hsp70相關(guān)性研究.pdf

1、隨著集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展以及國外一些瘦肉型應(yīng)激敏感豬的引進(jìn)，豬的運(yùn)輸導(dǎo)致的損失越來越明顯，熱休克蛋白70是熱休克蛋白家族中最重要的一類家族成員，它在應(yīng)激過程中發(fā)揮重要作用，具有“分子伴侶”、細(xì)胞保護(hù)、抗凋亡以及腫瘤免疫治療等獨(dú)特復(fù)雜的生物學(xué)功能，它的研究已成為生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。本課題通過建立運(yùn)輸應(yīng)激模型，選取具有代表性的心臟和腎臟兩個組織，研究不同品種仔豬運(yùn)輸應(yīng)激損傷與熱休克蛋白70及其mRNA之間的相關(guān)性，探討不同品種仔豬運(yùn)輸

2、應(yīng)激保護(hù)，為選育抗應(yīng)激品種提供依據(jù)。 AST、AIT、CK、T3、T4、Insulin以及Cortisol被用來衡量組織的損傷程度以及基礎(chǔ)代謝水平的變化。在連續(xù)切片上分別采用HE、免疫組化以及原位雜交技術(shù)顯示組織變化，熱休克蛋白70及其mRNA的定位，Western blot以及FQ RT-PCR用來對熱休克蛋白70及其mRNA進(jìn)行定量。 外周血清酶以及激素測定結(jié)果顯示：兩種品種仔豬運(yùn)輸應(yīng)激后AST的含量皆顯著高于對照

3、組(p<0.05)；運(yùn)輸組二花臉仔豬CK的含量顯著高于對照組(p<0.05)，而皮特蘭仔豬CK含量極顯著高于對照組(p<0.01)；二花臉仔豬在運(yùn)輸前后T3含量沒有顯著性差異，但是對照組皮特蘭仔豬血清T3含量顯著高于運(yùn)輸組；兩個品種豬在運(yùn)輸前后血液中的ALT、T4、Insulin以及Cortisol沒有顯著性的差異。 HE染色結(jié)果顯示兩種品種仔豬在運(yùn)輸后心臟和腎臟均顯示不同程度的損傷。免疫組化以及原位雜交染色結(jié)果在組織細(xì)胞沒有明

4、顯損傷和損傷比較輕微的部位熱休克蛋白70陽性信號明顯強(qiáng)于其他部位，并且在這些部位Hsp70 mRNA的表達(dá)信號也明顯強(qiáng)于其他部位。不同品種仔豬在運(yùn)輸后均表現(xiàn)出不同程度的損傷，Hsp70以及Hsp70 mRNA表現(xiàn)出相似的分布，其中二花臉仔豬更明顯的表現(xiàn)出應(yīng)激保護(hù)和Hsp70分布的特異性。 Western blot以及FQ RT-PCR結(jié)果顯示：在心臟和腎臟中，運(yùn)輸組二花臉仔豬熱休克蛋白70的含量顯著高于對照組(p<0.05)，

5、但是mRNA含量雖然升高，但是沒有顯著性差異；運(yùn)輸組皮特蘭仔豬蛋白雖然含量高于對照組，但是差異不顯著，但是mRNA的含量顯著高于對照組(p<0.05)。并且研究發(fā)現(xiàn)對照組中二花臉仔豬Hsp70mRNA的含量顯著高于皮特蘭仔豬(p<0.05)。 由血液生化指標(biāo)我們可以看出運(yùn)輸應(yīng)激都能夠引起二花臉和皮特蘭仔豬的應(yīng)激損傷，并且皮特蘭仔豬損傷表現(xiàn)更明顯。組織損傷觀察以及Hsp70及其mRNA的定位我們可以觀察到在Hsp70及其mRNA

6、陽性信號比較強(qiáng)的區(qū)域組織細(xì)胞相對比較完整，我們可以推斷Hsp70發(fā)揮了應(yīng)激保護(hù)作用。蛋白定量技術(shù)顯示二花臉仔豬仔運(yùn)輸后能夠迅速產(chǎn)生Hsp70發(fā)揮保護(hù)作用，而皮特蘭雖然中Hsp70雖然升高，但是不明顯，說明二花臉仔豬的應(yīng)激保護(hù)性比較好，而這種Hsp70的迅速翻譯與二花臉基礎(chǔ)水平高表達(dá)Hsp70 mRNA應(yīng)該具有一定的相關(guān)性。在Hsp70 mRNA的定量檢測中發(fā)現(xiàn)，Hsp70在對照組二花臉仔豬中的表達(dá)高于皮特蘭(p<0.05)，而皮特蘭仔豬