移植前供鼠口服受鼠脾淋巴細胞對移植后GVHD影響的實驗研究.pdf

1、目的：本課題旨在研究探討經口服受鼠脾淋巴細胞誘導耐受的供鼠淋巴細胞輸注是否能減輕移植物抗宿主病(GVHD)，并保留最大的GVL效應。該研究為臨床防治移植物抗宿主病提供新的思路。 方法：以健康清潔級雄性DBA-2(H-2<'d>)小鼠為供者，隨機分成4組(1-4組)，分別用BALB/C鼠脾淋巴細胞、DBA鼠脾淋巴細胞、牛血清蛋白、普通飼料喂養(yǎng)，隔天喂養(yǎng)。單向MLR評估誘導耐受狀態(tài)。以雌性BALB/C小鼠(H-2<'d>)為受者，隨

2、機分成8組(A-D組，A<,1>-D<,1>組)。受鼠均給予<'60>Cor射線全身照射(6.0Gy)，A-D組受鼠同一天輸注3×10<'3>鼠P388白血病細胞，尾靜脈輸注來自于供者DBA-2小鼠的2×10<'7>脾淋巴細胞。A<,1>-D<,1>組受鼠不給予鼠白血病細胞輸注，僅尾靜脈輸注來自于供者DBA-2小鼠的2×10<'7>脾淋巴細胞。每日觀察A<,1>-D<,1>組受鼠體形、體位、毛發(fā)、進食及精神情況，稱量體重，觀察受鼠GVH

3、D一般表現(xiàn)。取發(fā)生GVHD的A<,1>-D<,1>組受鼠的肝臟、小腸、皮膚制作組織病理切片，觀察GVHD程度。A<,1>-D<,1>組受鼠外周血作流式細胞檢測CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴細胞比值進行免疫監(jiān)測。記錄A-D組小鼠外周血白細胞計數(shù)，觀察小鼠患白血病及死亡情況。 結果：接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的受鼠，出現(xiàn)弓背體位、翹毛、消瘦、精神萎靡、腹瀉等GVHD表現(xiàn)，與接受非耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的受鼠GVHD表現(xiàn)

4、相比較有所減輕。接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的A<,1>組受鼠平均體重增加4.45g，與其他各組相比較體重增加明顯(B<,1>、C<,1>、D<,1>組受鼠平均體重增加分別為2.05g、1.9g、1.88g)。病理切片檢查符合GVHD表現(xiàn)，接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的Al組受鼠GVHD表現(xiàn)減輕于其他組：肝臟：慢性肝炎樣改變，肝細胞水樣變性，肝索結構紊亂、解離；小腸：絨毛結構破壞，固有層有淋巴細胞浸潤，可見粘膜的破潰脫落；皮膚；真皮

5、層內毛細血管擴張，淋巴細胞浸潤。流式細胞術監(jiān)測顯示接受耐受狀態(tài)供鼠脾淋巴細胞輸注的A<,1>組受鼠外周血CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴細胞比值(6.81+0.635)明顯升高，與其他各組比較(CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴細胞比值分別為2.19±0.449、2.70±0.303、3.04±0.393)有顯著性差異(P<0.05)。接種白血病細胞的A-D組受鼠，各組發(fā)生白血病患病后死亡率無差別(X<'2>=0.904 P>0.