魚類養(yǎng)殖密度與脅迫相關(guān)基因表達(dá)的研究.pdf

1、本研究利用半定量RT-PCR法研究了不同養(yǎng)殖密度下錦鯉養(yǎng)殖密度相關(guān)基因的組織特異性、時(shí)效性表達(dá)，并且利用LC-MS分析了不同養(yǎng)殖密度下及高密度脅迫條件下魚體內(nèi)血清皮質(zhì)醇的應(yīng)激表達(dá)情況，旨在發(fā)現(xiàn)密度脅迫下抗逆基因的表達(dá)規(guī)律，綜合應(yīng)激的血液激素水平，獲得養(yǎng)殖密度脅迫下基于分子生物學(xué)的分子指標(biāo)。
　　 對(duì)密度脅迫相關(guān)基因hsp70，hsp90基因在錦鯉四種不同的養(yǎng)殖密度下的mRNA的表達(dá)情況作了分析探討。在密度脅迫條件下，五種組織的h

2、sp70 mRNA表達(dá)量總體上與養(yǎng)殖密度呈正相關(guān)，養(yǎng)殖密度對(duì)錦鯉的各組織都能造成一定程度上的脅迫效應(yīng)，基因表達(dá)具有密度依賴性。肌肉和肝臟在密度脅迫超過一定的限度后，表達(dá)量出現(xiàn)顯著變化，而且呈現(xiàn)積累現(xiàn)象，是確定合理養(yǎng)殖密度的理想生物指標(biāo)，hsp70是一個(gè)理想的養(yǎng)殖密度脅迫指示基因。
　　 Hsp90 mRNA在養(yǎng)殖密度脅迫下，各組織的表達(dá)基本上維持在一個(gè)相對(duì)較低的水平，15d和45d同時(shí)出現(xiàn)了hsp90 mRNA表達(dá)量增加的現(xiàn)象，

3、但具有組織特異性表達(dá)差異。利用血液、肌肉、腦組織hsp90 在高峰表達(dá)期內(nèi)的變化情況可以用作指示養(yǎng)殖密度對(duì)養(yǎng)殖個(gè)體的影響。Hsp90 可以作為在高效表達(dá)期內(nèi)的養(yǎng)殖密度脅迫生物指標(biāo)。
　　 MT mRNA在錦鯉各組織中組成型表達(dá)。高密度脅迫組的血液，肌肉，肝臟，腦組織在45d和75d都出現(xiàn)了表達(dá)的高峰值。血液、肌肉組織對(duì)密度脅迫作用下MT mRNA表達(dá)反應(yīng)較其他三個(gè)組織明顯，具有密度依賴性特點(diǎn)。隨著養(yǎng)殖密度的不斷增高，MT mRN

4、A的表達(dá)量也隨密度提高而增加，檢測(cè)高密度脅迫下血液、肌肉組織的MT mRNA的表達(dá)情況可以初步判斷養(yǎng)殖魚類所受到養(yǎng)殖密度的脅迫程度。
　　 血清皮質(zhì)醇與hsp70、hsp90、MT的表達(dá)具有一定的關(guān)系，高密度脅迫條件下，hsp70 mRNA在45d，75d基因的表達(dá)量最高，hsp90 mRNA在15d，45d達(dá)到最高，而MT mRNA的表達(dá)量也在45d和75d達(dá)到最高峰，與之相關(guān)的血清皮質(zhì)醇激素48h，45d到達(dá)了兩個(gè)表達(dá)的高峰

5、值。45d脅迫基因的表達(dá)量與血清皮質(zhì)醇的表達(dá)量呈正相關(guān)。75d血清皮質(zhì)醇的表達(dá)量下降，hsp70，MT的表達(dá)量維持相對(duì)較高的表達(dá)水平，呈負(fù)相關(guān)的規(guī)律，而hsp90的表達(dá)量則明顯下降，與皮質(zhì)激素的表達(dá)呈正相關(guān)性。
　　 利用脅迫相關(guān)基因hsp70，hsp90，MT的表達(dá)在一定程度上可以反映養(yǎng)殖密度對(duì)養(yǎng)殖魚體的應(yīng)激程度，結(jié)合血清皮質(zhì)激素的表達(dá)情況，綜合養(yǎng)殖魚類的行為學(xué)、生長(zhǎng)指標(biāo)，可以建立基于養(yǎng)殖密度下魚體應(yīng)激的檢測(cè)方法，從細(xì)胞脅迫水