茉莉酸甲酯和水楊酸對(duì)菊芋懸浮細(xì)胞菊糖含量的影響.pdf

1、菊芋(Helianthus tuberosus L.)是一種向日葵屬多年生草本植物，它具有較強(qiáng)的抗逆性，能在干旱、鹽堿、嚴(yán)寒等惡劣環(huán)境下生長(zhǎng)，在國(guó)內(nèi)外被廣泛種植。菊芋塊莖中富含菊糖，菊糖是一種多聚果糖，有多種生理功能，目前被廣泛應(yīng)用到藥業(yè)及食品工業(yè)中。
　　利用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)提高植物次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量，是生產(chǎn)某些代謝產(chǎn)物的新方法。本試驗(yàn)以菊芋塊莖為材料，誘導(dǎo)出塊莖的愈傷組織，進(jìn)而建立了菊芋塊莖懸浮細(xì)胞系，并對(duì)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)

2、化。以茉莉酸甲酯和水楊酸為誘導(dǎo)子，研究其對(duì)菊芋懸浮細(xì)胞菊糖含量的影響，為利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)進(jìn)行菊糖工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。
　　本試驗(yàn)研究結(jié)果如下:
　　(1)本研究首先誘導(dǎo)出菊芋塊莖愈傷組織，用MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L培養(yǎng)基可誘導(dǎo)出淡黃色，疏松均一的愈傷組織。
　　(2)利用誘導(dǎo)出的愈傷組織，轉(zhuǎn)接到MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L液體培養(yǎng)基中，建立了菊芋懸浮細(xì)胞系，在pH為

3、5.8～6.0，蔗糖濃度為30g/L，脯氨酸0.5 mg/L、谷氨酰胺1 mg/L的生長(zhǎng)條件下，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)最好。進(jìn)一步建立了懸浮細(xì)胞系生長(zhǎng)曲線(xiàn)、pH變化曲線(xiàn)，得知細(xì)胞在第6天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在18天生長(zhǎng)量最大。
　　(3)建立了高效液相色譜測(cè)定懸浮細(xì)胞菊糖含量的方法，采用蒸發(fā)光檢測(cè)器，以乙腈和水為流動(dòng)相（乙腈∶水=78∶22），流速1mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣時(shí)間為20min。
　　(4)通過(guò)添加不同濃度的茉莉酸甲酯，

4、確定了100μmmol/L的茉莉酸甲酯為最佳濃度，可誘導(dǎo)細(xì)胞干重達(dá)到最大，為7.908mg/mL，誘導(dǎo)菊糖含量達(dá)到最高，為21.3％，菊糖產(chǎn)量與對(duì)照相比提高了71.13％;同時(shí)通過(guò)不同時(shí)間添加茉莉酸甲酯，確定了在第6天，即細(xì)胞即將進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)添加茉莉酸甲酯，細(xì)胞干重達(dá)到最大，為7.888mg/mL，菊糖含量最高，為21.5％，菊糖產(chǎn)量與對(duì)照相比提高了72.35％。
　　(5)通過(guò)添加不同濃度的水楊酸，確定了60μmmol/L的