一種新型狂犬病毒表位復(fù)合疫苗的篩選、鑒定及其免疫原性研究.pdf

1、狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies Virus)引起的人獸共患的世界性傳染病，每年全世界有超過55，000人死于狂犬病毒的感染，中國是狂犬病的高發(fā)國家之一。動(dòng)物或人感染狂犬病后，病毒會(huì)進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起神經(jīng)細(xì)胞功能的紊亂，一旦發(fā)病，目前無法醫(yī)治，疫苗是唯一能夠預(yù)防狂犬病的方法。
　　狂犬病疫苗的開發(fā)已經(jīng)有120多年的歷史，目前中國使用的疫苗是由狂犬病毒弱毒株開發(fā)的滅活疫苗，且自從2005年之后，國內(nèi)生產(chǎn)的疫苗中都不含有任何佐劑

2、。因此現(xiàn)有的疫苗往往存在免疫原性較差、抗體產(chǎn)生緩慢、免疫程序繁瑣等不足，在嚴(yán)重咬傷的情況下，還需要注射昂貴的免疫球蛋白進(jìn)行輔助治療。另一方面，由于狂犬病毒的潛伏期最短在7天左右，在注射疫苗后仍然有可能由于機(jī)體未能產(chǎn)生有效的體液免疫和細(xì)胞免疫而發(fā)病，造成嚴(yán)重后果。因此開發(fā)新型狂犬疫苗是解決現(xiàn)有疫苗不足的有效途徑，而國內(nèi)外關(guān)于改進(jìn)現(xiàn)有狂犬疫苗的研究報(bào)道并不多，僅僅停留在改進(jìn)免疫策略或者探索使用基因工程技術(shù)改造疫苗等，取得有效進(jìn)展的很少。

3、r>　　本文主要從疫苗佐劑和表位疫苗的角度開發(fā)了一種新型狂犬病毒復(fù)合表位疫苗，研究內(nèi)容分為如下幾個(gè)部分:
　　首先，本文初次研究了單磷酰脂質(zhì)A(MPLA)作為狂犬疫苗佐劑促進(jìn)機(jī)體免疫應(yīng)答的機(jī)制，證明了其作為狂犬疫苗潛在佐劑的可行性。研究證明MPLA作為一種已知的TLR4配體，一方面能夠加快特異性狂犬病毒抗體在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的速度，另一方面能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生具有細(xì)胞殺傷作用的Tc細(xì)胞和以Th2型為主的免疫應(yīng)答反應(yīng)，并誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生IFN

4、-γ和IL-4。
　　其次，本文從表位疫苗的角度出發(fā)，篩選出4條狂犬病毒的細(xì)胞表位，為下一步狂犬病表位疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。這部分的研究以BALB/c小鼠為哺乳動(dòng)物模型，通過生物信息學(xué)手段，從狂犬病毒糖蛋白和核蛋白中預(yù)測(cè)出12條細(xì)胞表位，并利用免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)方法（ELISPOT、流式細(xì)胞術(shù)等），從12條表位中篩選出4條狂犬病毒的候選表位（G367-381、G333-341、N92-106和N409-423），這些表位經(jīng)過體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，

5、證明其能夠促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的分泌及T細(xì)胞的分化。其中G333-341作為CTL表位，而G367-381、N92-106和N409-423作為Th表位。
　　最后，本文進(jìn)一步將篩選到的細(xì)胞表位加上棕櫚酸基團(tuán)，合成了4條不同的多肽，添加MPLA研制成了一種狂犬病毒復(fù)合表位疫苗，并在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行了初步的機(jī)理研究。通過免疫BALB/c小鼠以及檢測(cè)其相關(guān)細(xì)胞免疫應(yīng)答指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)合成的多肽中，多肽C具有顯著的促進(jìn)T