血小板膜糖蛋白唾液酸化及MicroRNA在原發(fā)免疫性血小板減少癥發(fā)病中的意義及作用機制.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行了論述。
　　第一部分 血小板膜糖蛋白唾液酸化在原發(fā)免疫性血小板減少癥中的表達和臨床意義
　　目的:探討血小板膜糖蛋白唾液酸化在原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)發(fā)病機制中的作用。
　　方法:應用流式細胞儀檢測43例初治成人ITP患者治療前后(其中包括15例大劑量地塞米松(HD-DXM)沖擊治療有效的ITP患者)和21例健康對照者血漿中血小板膜表面α2,3-唾液酸(α2,3-SA)和α2,6-唾液

2、酸(α2,6-SA)表達陽性百分率;并運用ELISA方法對血清中唾液酸含量及唾液酸酶活性和含量進行測定。
　　結果: ITP患者血小板膜糖蛋白表面α2,6-SA表達水平降低(80.79±15.51)％,與正常對照組(98.73±2.43)％比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);α2,3-SA表達水平為(85.43±13.22)％,與正常對照組(87.56±7.23)％比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。15例HD-DXM有

3、效治療的ITP患者治療后α2,6-SA表達水平較治療前顯著升高(P<0.05);而α2,3-SA表達水平治療前后無差異(P>0.05)。ITP患者外周血清中SA含量、唾液酸酶含量及活性均顯著增高。SA濃度為(799.77±126.64)μl/ml,唾液酸酶濃度和活性為(5207.06±2306.29)pg/ml、(84.32±48.33)u/l,分別與正常對照組比較(565.80±131.06)μl/ml、(3851.91±1769.9

4、1)pg/ml、(60.53±31.79)u/l,均有顯著性差異(P<0.001,P<0.05,P<0.05)。15例HD-DXM有效治療的ITP患者SA及唾液酸酶含量、活性治療前后均無顯著差異(P均>0.05)。
　　結論:血小板膜糖蛋白唾液酸化可能參與了ITP的發(fā)病機制。
　　第二部分 MicroRNA在原發(fā)免疫性血小板減少癥中的表達及作用機制
　　目的:本研究通過分析ITP患者Treg細胞中miRNA基因表達譜,

5、探討miRNA是否參與了ITP中 Treg的免疫調控。
　　方法:選取常州市第一人民醫(yī)院收治的初診ITP患者20例及正常對照者15例,應用免疫磁珠分選技術分選出ITP患者及正常對照者外周血Treg細胞;提取Treg細胞中總RNA,應用miRBase18.0數據庫的芯片探針微陣列芯片技術及Volcano Plot filtering軟件分析miRNA表達譜,篩選出兩組Treg細胞中差異性表達的miRNA;應用熒光實時定量PCR技術進

6、一步驗證ITP患者Treg細胞及治療前后血清中差異性表達的相關miRNA。
　　結果:與正常對照組相比,ITP患者Treg細胞內有差異表達的miRNAs502個,其中表達水平上調244個,表達水平降低258個;選擇表達降低的miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p應用熒光實時定量PCR進一步驗證,ITP患者Treg細胞中miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p基因表達水平顯著降低

7、,結果有統(tǒng)計學意義(P<0.03;P<0.01;P<0.02);miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p之間表達水平無明顯相關性。與正常對照相比ITP患者血清中miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p基因表達水平無明顯差異。
　　結論:與正常對照者比較,ITP患者外周血Treg細胞內存在差異性表達miRNAs;其中miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p