原發(fā)免疫性血小板減少性紫癜血小板蛋白組學診斷模型的研究.pdf

1、 背景：免疫性血小板減少性紫癜( Immune thrombocytopenic purpura,ITP)是一種臨床常見的免疫介導的出血性疾病,包括原發(fā)免疫性血小板減少性紫癜(primary immune thrombocytopenic purpura, pITP )和繼發(fā)免疫性血小板減少性紫癜(secondary immune thrombocytopenic purpura,sITP).其病因及發(fā)病機制至今都不是很明確,免疫調節(jié)

2、異常和自身抗體的產(chǎn)生可能發(fā)揮重要作用。pITP是指原因不明的原發(fā)性血小板過度破壞的自身免疫性血小板減少綜合癥,以皮膚出血、血小板計數(shù)減少、巨核細胞發(fā)育障礙、血小板生存時間縮短及血小板膜糖蛋白特異性自身抗體出現(xiàn)為特征,且早期并無特征性表現(xiàn),脾腫大也不明顯,只有血小板計數(shù)減少的血象改變,實驗室檢查沒有特異性指標,故其診斷仍是臨床排除性診斷。sITP是指在某些原發(fā)病的基礎上發(fā)生的免疫性血小板減少伴隨臨床出血的癥候群,主要有疾病相關和藥物誘導兩

3、種類型,如系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關、奎寧誘導等。其臨床表現(xiàn)與pITP相似,早期難以鑒別。因此,建立一種能夠早期診斷ITP的特異性實驗室診斷方法是當前臨床亟待解決的一個課題,具有重要的臨床意義和現(xiàn)實意義。
目的：本研究旨在探索一種簡單快速、靈敏度高、特異性好的ITP實驗診斷方法,為ITP的診斷、病情監(jiān)測、預后評價及個性化醫(yī)療提供新的實驗室依據(jù)。擬采用差異蛋白組學的方法,利用表面增強激光解析電離飛行時間質譜技術(surface enh

4、anced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI -TOF - MS)檢測pITP、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病、再生障礙貧血及正常人血小板蛋白質譜,分別篩選出 ITP和非ITP,pITP和sITP的差異蛋白質組,再結合人工神經(jīng)網(wǎng)絡(artificial neural network , ANN)建立診斷模型和鑒別診斷模型,并用SPSS17.0進行

5、盲法驗證。
方法：1.樣本收集：收集分別患有pITP、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病、再生障礙貧血等疾病的患者及正常人血液標本各60例,各疾病組符合國際疾病分類與診斷標準第十版(ICD-10)的診斷。從收集的標本中提取血小板蛋白質裂解液,并于-80℃凍存。2. 隨機分組：將各疾病組及正常人組標本分別按編號用隨機數(shù)字表法分組為訓練集和驗證集。訓練集用于篩選ITP的差異蛋白標志物并建立ANN診斷模型,驗證集用于模型診斷效度的盲法驗證。3

6、. 樣本檢測：應用SELDI蛋白芯片技術及其配套的金芯片(Gold Chip)檢測樣本,得到相應的蛋白質指紋圖譜。4.篩選差異的蛋白(P<0.01)：分別篩選出ITP和非ITP之間,pITP和sITP之間的差異蛋白。5.建立模型：利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡對篩選出的差異蛋白進行數(shù)據(jù)挖掘并建立ITP診斷模型和鑒別診斷模型。6. 盲法驗證及效能評價：利用SPSS17.0進行模型的盲法驗證及效能評價。7.差異蛋白初步鑒定：結合Swiss-Prot蛋白數(shù)

7、據(jù)庫對差異蛋白初步鑒定和分析。
結果：1. ITP和非ITP：篩選出5個最具差異性的蛋白質峰,其m/z比分別是3358、3400、3442、3493、9294。這些蛋白質ITP中均高表達。利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡建立ITP診斷模型,其靈敏度為71.6%,特異度為80.7%,。盲法驗證其靈敏度為70.0%(42/60),特異度77.8%(70/90),準確度為76.0%(112/150),ROC曲線下面積為0.806。2.pITP和s

8、ITP：篩選出5個最具代表性的差異蛋白,其m/z分別是2188、2495、3461、5156、7555。其中pITP組m/z為3461的蛋白質相對低表達,而m/z為2188、2495、5156、7555的蛋白質在pITP中相對高表達。利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡建立鑒別診斷模型,其靈敏度為96.9%,特異度為 71.4%。盲法驗證其靈敏度為 80%(27/30),特異度為 70%(21/30),準確度為80%(48/60),ROC曲線下面積0.86